小鼠脂肪酸合成酶（FAS）Elisa試劑盒樣本處理方法

【資料簡介】

小鼠脂肪酸合成酶（FAS）Elisa試劑盒樣本處理方法

實驗原理：
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中小鼠脂肪酸合成酶（FAS）水平。用純化的小鼠
脂肪酸合成酶（FAS）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入脂肪
酸合成酶（FAS），再與HRP 標(biāo)記的FAS 抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過
*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化
成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的脂肪酸合成酶（FAS）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm
波長下測定吸光度（OD 值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中小鼠脂肪酸合成酶（FAS）活性濃
度。

小鼠脂肪酸合成酶（FAS）Elisa試劑盒樣本處理方法

 

小鼠脂肪酸合成酶（FAS）Elisa試劑盒樣本處理方法

樣本處理及要求：
1. 血清：室溫血液自然凝固10-20 分鐘，離心20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上
清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。
2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20 分鐘后，離心
20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次
離心。
3. 尿液：用無菌管收集，離心20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程
中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4. 細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/
分）。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞
2
濃度達到100 萬/ml 左右。通過反復(fù)凍融，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20 分
鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
5. 組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)?br />用。標(biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器
將標(biāo)本勻漿充分。離心20 分鐘左右（2000-3000 轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。分裝后一份待
檢測，其余冷凍備用。
6. 標(biāo)本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上
進行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
7. 不能檢測含NaN3 的樣品，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。