牛腫瘤壞死因子α ELISA試劑盒自備材料：
1.  蒸餾水。
2.  加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
3.  振蕩器及磁力攪拌器等。

試劑的準備：
 
1.   標準品：標準品的系列稀釋應(yīng)在實驗時準備，不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行：
500pg/ml （6號標準品） 原倍濃度不用稀釋直接加入50ul
250pg/ml （5號標準品） 100ul的原倍標準品加入100ul的標準品稀釋液
125pg/ml （4號標準品） 100ul的5號標準品加入100ul的標準品稀釋液
62.5pg/ml （3號標準品） 100ul的4號標準品加入100ul的標準品稀釋液
31.2pg/ml （2號標準品） 100ul的3號標準品加入100ul的標準品稀釋液
15.6pg/ml （1號標準品） 100ul的2號標準品加入100ul的標準品稀釋液
0pg/ml （空白對照） 原倍濃度不用稀釋直接加入50ul

2.   洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。

牛腫瘤壞死因子α ELISA試劑盒操作步驟：
 
1.使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。
2.根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
3.加入稀釋好后的標準品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的*標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育45分鐘。
4.甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作4次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
5.每孔加入100ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
6.甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作4次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
7.每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育5分鐘。避免光照。
8.取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。
9.在450nm波長處測定各孔的OD值。

牛腫瘤壞死因子α ELISA試劑盒結(jié)果判斷與分析：
 1、儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值
2、以吸光度OD值為縱坐標（Y），相應(yīng)的HBSAG標準品濃度為橫坐標（X），做得相應(yīng)的曲線，樣品的HBSAG含量可根據(jù)其OD值由標準曲線換算出相應(yīng)的濃度，再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。
3、檢測值范圍： 0-500pg/ml
4、敏感度：1.95pg/ml