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青島海博生物技術(shù)有限公司作者
中華人民共和國國家標準
公共場所毛巾、床上臥具微生物檢驗方法
細 菌 總 數(shù) 測 定
GB/T 18204.4-2000
1 范圍
本標準規(guī)定了公共場所毛巾、床上臥具細菌總數(shù)的測定方法。
本標準適用于公共場所內(nèi)公用毛巾、床上臥具細菌總數(shù)的測定。
2 引用標準
下列標準所包含的條文，通過在本標準中引用而構(gòu)成為本標準的條文。本標準出版時，所示版本均為有效。所有標準都會被修訂，使用本標準的各方應(yīng)探討使用下列標準版本的可能性。
GB /T 18204.2-2000 公共場所茶具微生物檢驗方法細菌總數(shù)測定
3 定義
本標準采用下列定義。
細菌總數(shù)aerobicbacterialcount
指被檢物品經(jīng)過采樣處理，在一定條件下培養(yǎng)后（培養(yǎng)基成分、培養(yǎng)溫度、培養(yǎng)時間、pH值、需氧性質(zhì)等）,25 cm2表面上所含菌落的總數(shù)。本方法規(guī)定的培養(yǎng)條件下所得結(jié)果，只包括一群在營養(yǎng)瓊脂上生長發(fā)育的嗜中溫性需氧菌落總數(shù)。
細菌總數(shù)主要作為判定公用毛巾、床上臥具被污染程度的標志，檢測細菌總數(shù)，為公用毛巾、床上臥具清洗消毒效果的判定和評價提供依據(jù)。
*法 涂抹法
4 儀器
見GB/T 18204. 2-2000中第4章
5 培養(yǎng)基和試劑
見GB/T 18204.2-2000中第5章。
6 檢驗程序
見GB/T 18204. 2-2000中第6章。
7 操作步驟
7.1 采樣方法
7.1.1隨機抽取清洗消毒后準備使用的毛巾、床上臥具。
7.1.2用滅菌生理鹽水濕潤棉拭子，在毛巾、枕巾對折后兩面的*各25cm2（5cm ×5cm）面積范圍;床單、被單在上下兩部各25cm2面積范圍內(nèi)有順序地來回涂抹，用滅菌剪刀剪去棉簽手接觸的部分，將棉拭子放入10mL生理鹽水內(nèi)，4h內(nèi)送檢。
7.2 檢驗方法
7.2.1 將放有棉拭子的試管充分振搖。此液為1:10稀釋液。
7.2.2 以無菌操作，吸取2 mL檢樣，分別注人到兩塊滅菌平皿內(nèi)，每皿1 mL。如污染嚴重，可十倍遞增稀釋，即吸取1 mL加到9 mL滅菌生理鹽水中，混勻，此液為1:100稀釋液。每個稀釋度做兩塊平皿。
7.2.3 將已融化冷至45℃左右的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基傾入平皿，每皿約15 mL，并立即旋搖平皿。冷凝后放36℃士1℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)48 h.
8 菌落計數(shù)方法
作平皿菌落計數(shù)時，可用肉眼直接觀察，必要時用放大鏡檢查以防遺漏，在記下各平皿的菌落數(shù)后，求出同一稀釋度各平皿生長的平均菌落數(shù)。若平皿中有連成片狀的菌落，該平皿不宜計數(shù);若片狀菌不到平皿中的一半，而其余一半中菌落分布均勻，則可將此半個平皿菌落計數(shù)后乘以2，所得結(jié)果代表全皿菌落數(shù)。
公用毛巾、床上臥具細菌總數(shù)按公式（1）計算:
M=k·n/2
式中:M— 細菌總數(shù)，cfu/25
K— 稀釋倍數(shù);
n— 平均菌落數(shù)。
9 菌落數(shù)報告方式
見GB/T 18204. 2-2000中第9章。
第二法戳印法
10 原理
用特制的內(nèi)徑為3.57cm 的培養(yǎng)皿，注入營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，使其表面比皿邊高2-3mm。采樣時將培養(yǎng)基表面和被檢物品表面吻合，輕輕按壓3-4s，使其被檢查物體表面能夠均勻地與培養(yǎng)基表面接觸。然后蓋上皿蓋，置恒溫箱37℃培養(yǎng)24 h后，計數(shù)培養(yǎng)基表面（10cm,）生長的細菌菌落數(shù)。
11 培養(yǎng)基和試劑
11.1營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基
11.1.1成 分:蛋白胨 10g
牛肉膏 3 g
氯化鈉 5 g
瓊脂 15-20g
蒸餾水 1000 mL
11.1.2 制法:將上述成分混合后，加熱溶解，調(diào)pH為7.4-7.6 ，過濾、分裝于玻璃容器中，經(jīng)121℃滅菌20 min，儲存于冷暗處備用。
12 儀器
12.1 高壓蒸汽滅菌器
12.2 干熱滅菌器
12.3 恒溫箱。
12.4 冰箱。
12.5 特制戳印平皿（內(nèi)徑3.57cm）,
12.6 制備培養(yǎng)基用的一般器材。
13 檢驗步驟
13.1 將溶化并冷至50-55℃的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，傾注于已滅菌的特制戳印平皿內(nèi)（使皿內(nèi)部培養(yǎng)基平面比皿邊緣高2-3 mm），每皿約10 mL，待凝固后，蓋上皿蓋（皿蓋與培養(yǎng)基隔一定空間），翻轉(zhuǎn)平皿，在4℃下保存?zhèn)溆谩?/span>
13.2 將被檢物品放平，再將皿蓋打開，放在被檢物品表面上，用手輕輕按壓3-4s，取下，蓋上皿蓋，置37℃恒溫箱內(nèi)，培養(yǎng)24 h后觀察結(jié)果，計數(shù)細菌菌落數(shù)。
14 結(jié)果計算
用肉眼觀察，點數(shù)培養(yǎng)基表面菌落數(shù)，其細菌總數(shù)為10cm,（每皿）表面積的菌落數(shù)。本法簡 便易行、可靠，可直接采樣做細菌培養(yǎng)。
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