一、概述

    PCR又稱聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polymerase chain reaction)，是1985年由美國的Kary Mullis*并由美國Cetus公司開發(fā)的一項體外擴(kuò)增DNA的方法。應(yīng)用該方法可使極微量的特定DNA片段在幾小時內(nèi)迅速擴(kuò)增至百萬倍，因而一經(jīng)問世便在短短的數(shù)年內(nèi)就得到了迅速發(fā)晨和實際應(yīng)用，并在原有基礎(chǔ)上結(jié)合各種生化分子生物學(xué)技術(shù)衍生出了許多改良技術(shù)。這些技術(shù)顯示出了巨大的潛力，發(fā)揮著越來越大的作用，也正因為如此它們被譽(yù)為20世紀(jì)80年代分子生物學(xué)革命和生物技術(shù)的飛躍。

（一）PCR原理

     PCR是依據(jù)DNA模板的特性，模仿體內(nèi)的復(fù)制過程，在體外合適的條件下以單鏈DNA為模板，以人工設(shè)計和合成的寡核苷酸為引物，利用熱穩(wěn)定的DNA聚合酶延5’-3’方向摻人單核苷酸來特異性的擴(kuò)增DNA片段的技術(shù)。

（二）PCR反應(yīng)體系

     PCR反應(yīng)體系主要由引物、dNTP、DNA聚合酶(TaqDNA聚合酶)、緩沖液、Mg2+和核酸模板組成。

（三）PCR反應(yīng)參數(shù)

     在PCR反應(yīng)中每輪循環(huán)的各步反應(yīng)時間不應(yīng)過長，以免降低TaqDNA聚合酶的活性。下面介紹PCR反應(yīng)中的一些具體參數(shù)。

1.變性    

2.退火  

3.延伸  

4.循環(huán)次數(shù)

（四）常見的PCR種類

1.熱啟動PCR    

2.一步單管PCR    

3.多重PCR

4.依賴PCR的DNA指紋圖譜技術(shù)  

5.PCR-單鏈構(gòu)想多態(tài)性分析

6.mRNA差異顯示技術(shù)  

7.隨機(jī)引物擴(kuò)增DNA多態(tài)性（RAPD）

8.以微衛(wèi)星DNA介導(dǎo)的PCR技術(shù)

9.基因間重復(fù)性回文片段（REP）和基因內(nèi)重復(fù)性一致序列（ERIC）的擴(kuò)增

10.擴(kuò)增片段長度多態(tài)性分析（AFLP）

11.限制性長度多態(tài)性分析（RFLP）

12.用于RNA病毒檢測的核酸擴(kuò)增技術(shù)

（五）PCR技術(shù)用于檢測的主要步驟

（1）運(yùn)用化學(xué)手段對目標(biāo)DNA進(jìn)行提取。

（2）設(shè)計并合成引物，引物設(shè)計或合成的好壞直接決定PCR擴(kuò)增的成效。

（3）進(jìn)行PCR擴(kuò)增。

（4）克隆并篩選鑒定PCR產(chǎn)物，將擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行電泳、染色，在紫外光照射下可見擴(kuò)增特異區(qū)段的DNA帶．根據(jù)該帶的不同即可鑒定不同的DNA。

（5）DNA序列分析