小鼠細胞間粘附分子（sICAM-）ELISA試劑盒技術參數(shù)

【資料簡介】

小鼠細胞間粘附分子(sICAM-)ELISA試劑盒實驗原理
本實驗采用雙抗體夾心 ABC-ELISA法。用抗小鼠 sICAM- 單抗包被于酶標板上，標準品和樣品中的 sICAM-與單抗結合，加入化的抗小鼠sICAM-，形成免疫復合物連接在板上，辣根過氧化物酶標記的Streptavidin與結合，加入底物工作液顯藍色，zui后加終止液硫酸，在450nm處測OD值，sICAM-濃度與OD值成正比，可通過繪制標準曲線求出標本中sICAM-濃度。
試劑盒組成（2-8℃保存）
酶標板（Coated Wells）
96孔
酶標抗體工作液（Enzyme Conjugate）
2ml
0×標本稀釋液（Sample Buffer）
2ml
20×濃縮洗滌液（Wash Buffer）
50ml
標準品（Standards）：.2ng/瓶
2瓶
底物工作液（TMB Solution）
2ml
抗體工作液（Biotinylated Antibody）
2ml
終止液（Stop Solution）
2ml
小鼠細胞間粘附分子(sICAM-)ELISA試劑盒準備試劑與收集血樣
. 收集標本：血清、血漿（EDTA、檸檬酸鹽、肝素抗凝）、細胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿等盡早檢測，2-8℃保存48小時；更長時間須冷凍（-20 ℃或-70 ℃）保存，避免反復凍融。標本測定前用標本稀釋液至少作： 00稀釋（取0ul，加標本稀釋液990ul,稀釋00倍）。
2. 標準品液配制：使用前加入0.3ml蒸餾水混勻，配成4000pg/ml的溶液。設標準管8管，每管加入標本稀釋液200ul。在管中加入4000pg/ml的標準品溶液200ul混勻后用加樣器吸出200ul，移至第二管。如此反復作對倍稀釋，從第七管中吸出200ul棄去。第八管為空白對照。
3. 0×標本稀釋液用蒸餾水作:0倍稀釋（示例：ml濃稀釋液+9ml蒸餾水）。
4. 洗滌液：用重蒸水:20稀釋（示例：ml濃縮洗滌液加入9ml的重蒸水）
檢測程序
. 加樣：每孔各加入標準品或待測樣品00ul，將反應板充分混勻后置37℃20分鐘。
2. 洗板：用洗滌液將反應板充分洗滌4-6次，向濾紙上印干。
3. 每孔中加入抗體工作液00ul。將反應板充分混勻后置37℃60分鐘。
4. 洗板：同前。
5. 每孔加酶標抗體工作液00ul。將反應板置37℃30分鐘。
6. 洗板：同前。
7. 每孔加入底物工作液00ul，置37 ℃暗處反應5分鐘。
8. 每孔加入00ul終止液混勻。
9. 30分鐘內(nèi)用酶標儀在450nm處測吸光值。
結果計算與判斷
. 所有OD值都應減除空白值后再行計算。
2. 以標準品2000、000、500、250、25、62.5、3.2、0 pg/ml為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上作圖，畫出標準曲線。
3. 根據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出相應sICAM-含量，再乘上稀釋倍數(shù)即可。
試劑盒性能
. 靈敏度：zui小的sICAM- 檢測濃度小于5pg/ml。
2. 特異性：可同時檢測重組或天然的小鼠sICAM-。不與小鼠其它細胞因子有交叉反應。
3. 重復性：板內(nèi)、板見變異系數(shù)均小于0％。
注意事項
. 以上標準孔及待測樣品均建議做復孔，每次測定應同時做標準曲線。
2. 洗滌過程很關鍵。洗滌不充分將導致度誤差及OD值錯誤地升高。
3. 板條開封后剩余板條要再封好，保持板條干燥。
4. 本試劑盒宜置4oC冰箱保存。
5. 本小鼠細胞間粘附分子(sICAM-)ELISA試劑盒僅用于科研，不能用于臨床診斷！