人胎球蛋白 A（FETU-A）定量檢測試劑盒使用說明書

【資料簡介】

人胎球蛋白 A(FETU-A) 定量檢測試劑盒本試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）。將標(biāo)準(zhǔn)品、待測樣本加入到預(yù)
先包被人胎球蛋白 A(FETU-A)多克隆抗體透明酶標(biāo)包被板中，溫育足夠時間后，洗滌除去未
結(jié)合的成分，再加入酶標(biāo)工作液，溫育足夠時間后，洗滌除去未結(jié)合的成分。依次加入底物
A、B，底物（TMB）在辣根過氧化物酶（HRP）催化下轉(zhuǎn)化為藍(lán)色產(chǎn)物，在酸的作用下變成
黃色，顏色的深淺與樣品中人胎球蛋白 A(FETU-A)濃度呈正相關(guān)，450nm 波長下測定 OD 值 ，
根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的 OD 值，計算樣本中人胎球蛋白 A(FETU-A)含量。
試劑盒組成
酶標(biāo)包被板 2 孔×4 條 7 底物夜 A 3mL
2 標(biāo)準(zhǔn)品： 00ug/ml 0.6mL 8 底物夜 B 3mL
3 20 倍濃縮洗滌液 20mL 9 終止液 3mL
4 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 3mL 0 說明書 份
5 樣本稀釋液 3mL 封板膜 張
6 酶標(biāo)試劑 3mL 2 密封袋 個
備注：標(biāo)準(zhǔn)品用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液依次稀釋為：00、50、25、2.5、6.25、3.2ug/ml
人胎球蛋白 A(FETU-A) 定量檢測試劑盒操作步驟
、準(zhǔn)備：從冰箱取出試劑盒，室溫復(fù)溫平衡 30 分鐘。
2、配液：用蒸餾水將 20 倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。
3、加標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣本：取足夠數(shù)量的酶標(biāo)包被板，固定于框架上，分別設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔 、
待測樣本孔和空白對照孔，記錄各孔位置，在標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品 50μL；待測樣本孔中先
2
加入待測樣本 0μL，再加樣本稀釋液 40μL（即樣本稀釋 5 倍）；空白對照孔不加。
4、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 30min。
5、洗板：棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置 min，甩去洗滌液，吸水紙
上拍干，如此重復(fù)洗板 4 次（也可用洗板機(jī)按說明書操作洗板）。
6、加酶標(biāo)工作液：每孔加入酶標(biāo)工作液 50μL，空白對照孔不加。
7、溫育：重復(fù) 4 的操作。
8、洗板：重復(fù) 5 的操作。
9、顯色：每孔先加入顯色劑 A 液 50μL，再加入顯色劑 B 液 50μL，37℃避光顯色 5min。
0、終止：取出酶標(biāo)板，每孔加終止液 50μL，終止反應(yīng)（顏色由藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
、測定：以空白孔調(diào)零，在終止后 5 分鐘內(nèi)，用 450nm 波長測量各孔的吸光值（OD 值）。
2、計算：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對應(yīng)的 OD 值，計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣
本的 OD 值，在回歸方程上計算出對應(yīng)的樣品濃度，也可以使用各種應(yīng)用軟件來計算。zui終濃
度為實際測定濃度乘以稀釋倍數(shù)。
樣本要求
、樣本不能含疊氮鈉（NaN 3 ），因為疊氮鈉（NaN 3 ）是辣根過氧化物酶（HRP）的抑制劑。
2、標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能立即
試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3、樣本應(yīng)充分離心，不得有溶血及顆粒。
人胎球蛋白 A(FETU-A) 定量檢測試劑盒注意事項
、實驗嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，實驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。
2、酶標(biāo)包被板開封后如未用完，應(yīng)立即裝入密封袋中加干燥劑保存。
3、建議所有的標(biāo)準(zhǔn)品、樣本和空白對照都做雙份檢測，取平均值，以減小實驗誤差。
4、牢記樣本已經(jīng)稀釋 5 倍，計算結(jié)果乘以 5 才是樣本實際濃度。
5、本試劑盒定量范圍為 3.2-00ug/ml ，超過此范圍，為標(biāo)準(zhǔn)曲線延伸計算所得，不做為準(zhǔn)
確定量結(jié)果，請用特殊稀釋液稀釋后測定準(zhǔn)確結(jié)果（ 3.2-00ug/ml 范圍內(nèi)），乘以總稀釋倍數(shù)
即為樣本zui終濃度。
6、若顯色過淺，可適當(dāng)延長底物溫育時間。
7、為避免交叉污染，標(biāo)準(zhǔn)品、樣本和空白對照每加一個就要更換一次吸頭；酶標(biāo)工作液 、
樣本稀釋液和底物等公共組分，要懸臂加樣，不得碰到微孔；不得重復(fù)使用封板膜。
8、試劑盒保質(zhì)期內(nèi)使用，不同批號的試劑不得混用。
9、底物 B 對光敏感，避免長時間暴露于光下。