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人腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA檢測試劑盒

2015年12月23日 09:18:03人氣:88來源:上?ㄅ锟萍加邢薰

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關 鍵 詞人,腫瘤壞死因子α(TNF-α),試劑盒,ELISA
【資料簡介】

本試劑盒只能用于科學研究,不得用于醫(yī)學診斷

人腫瘤壞死因子α(TNF-α)ELISA檢測試劑盒

使用說明書

檢測原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被人腫瘤壞死因子α(TNF-α)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人腫瘤壞死因子α(TNF-α)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。

樣品收集、處理及保存方法

1.  血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2.  血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉離心30分鐘取上清。

3.  細胞上清液:3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4.  組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉離心10分鐘取上清。

5.  保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

自備物品

  1. 酶標儀(450nm)
  2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
  3. 37恒溫箱

操作注意事項

  1.   試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶,這屬于正常現象,水浴加熱使結晶*溶解后再使用。
  2.   實驗中不用的板條應立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。
  3.   預處理后的樣本無需稀釋,直接取50μL加樣即可。
  4.   嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。
  5.   所有液體組分使用前充分搖勻。

試劑盒組成

名稱

96孔配置

48孔配置

備注

微孔酶標板

12孔×8條

12孔×4條

標準品(6管)

0.5ml/

0.5mL/

樣本稀釋液

6mL

3mL

檢測抗體-HRP

10mL

5mL

20×洗滌緩沖液

25mL

15mL

按說明書進行稀釋

底物A

6mL

3mL

底物B

6mL

3mL

終止液

6mL

3mL

封板膜

2

2

說明書

1

1

自封袋

1

1

注:

1、標準品濃度依次為:16080、40、20、105 pg/mL.

2、在樣本值超過標準品zui高濃度的情況下,可用樣本稀釋液適當稀釋樣本。

試劑的準備

 20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

洗板方法

  1.   手工洗板:甩盡孔內液體,每孔加滿洗滌液,靜置1min后甩盡孔內液體,在吸水紙上拍干,如此洗板5次。
  2.   自動洗板機:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。

操作步驟

  1.   從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
  2.   設置標準品孔、樣本孔和空白孔,空白孔什么都不加;標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;
  3.   待測樣本孔各加待測樣本50μL;
  4.   隨后標準品孔和樣本孔中(空白孔不加)加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
  5.   棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。
  6.   所有孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
  7.   所有孔加入終止液50μL,15min內,在450nm波長處測定各孔的OD值。

結果判斷

 繪制標準曲線:在Excel工作表中,以標準品濃度作橫坐標,對應OD值作縱坐標,繪制出標準品線性回歸曲線,按曲線方程計算各樣本濃度值。

試劑盒性能

1.  準確性:標準品線性回歸與預期濃度相關系數R值,大于等于0.9900。

2.  靈敏度:zui低檢測濃度小于1.0 pg/mL。

3.  特異性:不與其它可溶性結構類似物交叉反應。

4.  重復性:板內、板間變異系數均小于15%。

5.  貯藏:2-8℃,避光防潮保存。

6.  有效期:6個月

免責聲明

1.   試劑盒僅供研究使用,不得用于臨床實驗或人體實驗,否則所產生的一切后果,由實驗者承擔,本公司概不負責。

2.   嚴格按照說明書操作,實驗者違反說明書操作,后果由實驗者承擔。

 

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