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農(nóng)桿菌濃度

2015年05月28日 09:39:42人氣:372來(lái)源:上海通蔚生物科技有限公司

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【資料簡(jiǎn)介】

    在實(shí)驗(yàn)室已初步建立的農(nóng)桿菌EHA105介導(dǎo)銀耳轉(zhuǎn)基因方法的基礎(chǔ)上,以銀菌株Tr21-01為出發(fā)菌株,通過(guò)凍融法將攜帶有潮霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶(Hph)基由于遺傳標(biāo)記及人胰島素基因(BAC)為目的基因的質(zhì)粒pBHg-BCA導(dǎo)入根癌農(nóng)桿菌GV3101,LBA4404和AGL-1中,并進(jìn)一步介導(dǎo)轉(zhuǎn)究。實(shí)驗(yàn)結(jié)L-1具有較高的轉(zhuǎn)化率;GV3101轉(zhuǎn)化率較低,且假陽(yáng)性較高;LBA4404無(wú)抗性菌落長(zhǎng)出。此結(jié)果表明不同的農(nóng)桿菌侵染銀耳芽孢能力具有差異性,且對(duì)受體侵染具有一定的特異性。

   本實(shí)驗(yàn)以農(nóng)桿菌EHA105為參照菌株,對(duì)農(nóng)桿菌AGL-1介導(dǎo)轉(zhuǎn)化銀耳進(jìn)行研究;谵r(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)基因受諸多因素的影響,本實(shí)驗(yàn)從農(nóng)桿菌與銀耳芽孢共培養(yǎng)時(shí)間、銀耳芽孢濃度、誘導(dǎo)劑乙酰丁香酮(AS)的濃度、轉(zhuǎn)率等方面進(jìn)行優(yōu)化。其轉(zhuǎn)化前提優(yōu)化結(jié)果為:AGL-1菌液OD值為0.4~0.5,AS誘導(dǎo)培養(yǎng)濃度為250μg/mL、共培養(yǎng)濃度為150μ耳芽孢濃度為10~8/mL,共培養(yǎng)72h轉(zhuǎn)化率zui高,可達(dá)500個(gè)/10~8,且陽(yáng)性菌落為89%;EHA105菌液OD值為0.4~0.5。

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