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魚Bcl-2相關(guān)X(BAX)試劑盒使用說明書

2015年05月15日 08:59:46人氣:775來源:上海紀(jì)寧實(shí)業(yè)有限公司

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關(guān) 鍵 詞 魚Bcl-2相關(guān)X(BAX)試劑盒使用說明書
【資料簡介】

 魚Bcl-2相關(guān)X(BAX)試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍:
0.2μg/L -9μg/L
使用目的:
本試劑盒用于測定魚血清、血漿及相關(guān)液體樣本中 Bcl-2相關(guān)   X
(BAX)含量。
實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中魚  Bcl-2 相關(guān) X
(BAX)
。用純化的魚
Bcl-2相關(guān) X
(BAX)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入Bcl-2
(BAX),再與 HRP標(biāo)記的  Bcl-2相關(guān)  X        (BAX)抗體    ,形成抗體-抗原-酶
相關(guān)  X
標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB顯色。TMB在   HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,
并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的。顏色的深淺和樣品中的 Bcl-2相關(guān)  X        (BAX)呈正相
關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長下測定吸光度(OD 值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中魚 Bcl-2 相
關(guān) X        (BAX)濃度。
試劑盒組成
30倍濃
20ml×1瓶
6ml×1瓶
12孔×8條
6ml×1瓶
6ml×1瓶
6ml×1/瓶
終止液
6ml×1瓶
0.5ml×1瓶
1.5ml×1瓶
2   酶標(biāo)試劑
3   酶標(biāo)包被板
4   樣品稀釋液
5   顯色劑 A液
6   顯色劑 B液
標(biāo)準(zhǔn)品(16μg/L)
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
10   說明書
11   封板膜
12   密封袋
2張
1個(gè)
標(biāo)本要
1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能
馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,因   NaN3抑制辣根過
(HRP)活性。
 魚Bcl-2相關(guān)X(BAX)試劑盒使用說明書操作步驟
1.  標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀
釋。
8μg/L
4μg/L
2μg/L
1μg/L
0.5μg/L
5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品
4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品
3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品
2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品
1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品
150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入  150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
150μl的  5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入  150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
150μl的  4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入  150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
150μl的  3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入  150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
150μl的  2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入  150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2.  加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、
待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,
然后再加待測樣品 10μl(樣品zui終稀釋度為 5倍)。
 魚Bcl-2相關(guān)X(BAX)試劑盒使用說明書加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。
溫育:用封板膜封板后

37℃溫育30分鐘。
30倍稀釋后備用
配液:將 30倍濃
洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜
重復(fù) 5次,拍干。
30秒后棄去,如此
加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl,空白孔除外。
溫育:操作同 3。
洗滌:操作同 5。
顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
10分鐘.
10.終止:每孔加終止液    50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn))。
11.測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。測定應(yīng)在加終止
液后 15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
操作程序總:
計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo), OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上
,根據(jù)樣品的
OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與  OD值計(jì)算出標(biāo)

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