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技術中心

孔雀石綠檢測試劑盒說明書

2014年07月18日 10:35:08人氣:246來源:卡邁舒(上海)生物科技有限公司

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關 鍵 詞孔雀石綠檢測試劑盒
【資料簡介】

使用之前要讀說明書(中文說名書僅供參考請以英文為準)
適用
本試劑盒適用于水產品中孔雀綠的定量檢測。
原理
本試劑盒原理是競爭酶聯(lián)免疫檢測方法,利用萃取劑從樣品中提取到孔雀石綠. 在固相載體微孔板中加入標準和處理的樣品,然后加入孔雀石綠抗體,反應30分洗孔,然后加入HRP標記的孔雀石綠孵育30分后洗板,洗滌后加入顯色劑,結合的酶將無色的顯色劑轉化為藍色的產物;加入反應終止液后使顏色由藍色變?yōu)辄S色;在450nm波長進行檢測,樣品中的孔雀石綠濃度與吸收光強度成反比 。
特異性
與孔雀石綠類似物的交叉反應
Compound %
CR
Malachite green 孔雀綠
*
Leucomalachite 隱色孔雀綠
1%
Crystal Violet 結晶紫
120%
Leucocrystal Violet 隱色結晶紫
2%
檢測限
水產品: 0.5 ppb
試劑盒組成
96孔酶標板:1塊(8×12條)。 標準品貯備液(Standard): 1瓶(0.4ml/瓶),100ppb。
酶標記物:1瓶(25倍, 0.8ml)HRP標記的孔雀石綠結合物
孔雀石綠抗體:1瓶(9ml)
底物顯色液:1瓶(16ml)
終止液:1瓶(12ml 、1N HCl)。
結合物稀釋液:1瓶(15ml)。
樣本稀釋緩沖液:2瓶(25ml)
濃縮洗滌液:1瓶(5倍, 100ml/瓶)、酶標板的洗滌。
使用說明書
注意
不要使用過了有效日期的孔雀石綠檢測試劑盒,不同批次、不同試劑盒之間的試劑等內容不可混用。不使用被污染和稀釋的試劑。使用前將所有的試劑拿到室溫(20℃-28℃),但不要超出24小時?兹甘G是抗生素應小心對待。終止液為1M的鹽酸避免接觸皮膚,如果不小心滴到皮膚上要馬上用水清洗。洗液是5乘的在使用時要稀釋。

還需設備
?
去離子水或重蒸水
?
100ml或更大的量筒
?
樣品提取和采集用的玻璃器皿
?
甲醇
?
25、50、100 和250μL 單道或多道移液器
?
計時器
?
旋渦混合器
?
洗瓶
?
吸水紙
?
離心機
?
450nm 濾光片的酶標儀
樣品制備(肉 1:20 稀釋)
1 魚蝦去皮取肉,用勻漿器均質樣品,稱取5g均質好的樣品置于離心管中2 加入10 mL乙腈,振蕩器震蕩30分
3 4000g離心10分鐘
4 輕輕倒出上清, 移入到另一個離心管。
5 用3ml乙腈活化氧化鋁柱(1-2滴/秒)。
6 取3ml樣品過柱。
7 收集樣品于一干凈試管中。
8 加入3ml乙腈洗柱并收集與上述步驟7試管中。
9 利用樣品稀釋液1:10的比例稀釋洗脫物(50ul+450ul),待用。
第二種前處理方法: (1:10 稀釋)
1. 樣品均質后稱取4g于離心管中;
2. 加入5ml 0.2MHCL,充分混合5min;室溫2000g離心5min
3. 吸取2.5ml上清液,加入5ml二氯甲烷 ,充分振蕩2分鐘;
4. 室溫2000g離心5min,去除上層液體;
5. 轉移2.5ml下層液體于另外一只玻璃試管中,50-60℃氮流蒸發(fā);
6. 殘留物溶于2ml乙腈,搖勻;
7. 用樣品稀釋液將混合洗出液稀釋10倍(50ul乙腈提取液+450ul樣品稀釋液);
8. 移取75ul進行分析。
酶交聯(lián)物制備
試劑盒提供的酶交聯(lián)物是25倍的,每次使用前都要稀釋。
標準稀釋液的制備
乙腈和樣品稀釋液1:9的比例混合使用
標準的制備
標準品濃度(ppb)
標準品稀釋液(ml)
標準品
1
4
40 uL
0.5
1
1.0ml 1ppb的標準液
0.1
1.8
0.2ml 1ppb的標準液
0.05
1
1ml 1ppb的標準液
0.025
0.5
0.5ml 0.05ppb的標準液
0.01
0.8
0.2ml 0.05ppb的標準液
0
1.000
0
操作步驟
1. 使
用前將試劑盒和樣品處理物提前從冰箱中拿出來使其達到室溫。裝有洗液的洗瓶。
2.從鋁箔袋中拿出要求數(shù)量的微孔條,放入干燥劑并重新封好袋子以免微孔條受潮。
3. 用移液器吸取75 μl 樣品處理物到對應的測試孔 ,同時在每個孔中都加入75 μl 抗體溶液。
4. 輕輕震動30秒使其混勻孵育30分。
5. 孵育完成后,將微孔中的溶液倒入水槽中,用配好的洗板緩沖液清洗微孔。每孔每次至少加入250ul,微震蕩洗滌后倒掉,重復三次,總共四次洗板。拍板,去掉殘留的洗液。
6. 每個孔加入150 μL 酶標結合物.
7. 輕輕震動30秒使其混勻孵育30分
8. 孵育完成后,將微孔中的溶液倒入水槽中,用配好的洗板緩沖液清洗微孔。每孔每次至少加入250ul,微震蕩洗滌后倒掉,重復三次,總共四次洗板。拍板,去掉殘留的洗液。
9. 每個孔加入150 μL 底物.孵育30分
10. 每孔加入 100 μL 終止液.
11. 450nm 下讀取每個孔的吸光度值(OD)
結果分析
1.
半定量結果的判定,可根據(jù)樣品的吸光度值與標準的吸光度值來判定,樣品的吸光度值低于某個標準的吸光度值,則說明樣品的孔雀石綠含量大于此標準的濃度,樣品的吸光度值高于某個標準的吸光度值,則說明樣品的孔雀石綠含量小于此標準的濃度。
2.
定量結果判定,需要以標準的吸光度值為X軸,標準濃度的對數(shù)為Y軸繪制曲線圖,將標準濃度吸光度值的點用直線連接,樣品的吸光度值也位于這條直線上,根據(jù)樣品的吸光度值在Y軸上即可找到相應樣品的濃度,如果樣品的吸光度值大于zui小標準的吸光度值或小于zui大標準的吸光度值,即可說明此樣品中孔雀石綠的含量小于0.01ppb或大于1ppb。
3. 當樣品的濃度高于1ppb 時要調節(jié)稀釋倍數(shù)來獲得zui終的濃度。

卡邁舒(上海)生物科技有限公司作者

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