微量蛋白膠回收試劑盒使用說(shuō)明書(shū)

【資料簡(jiǎn)介】

產(chǎn)品及特點(diǎn)    十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）不僅可用于檢測(cè)蛋白質(zhì)的相對(duì)分子質(zhì)量，而且也是分離純化蛋白質(zhì)的重要工具之一，隨著蛋白質(zhì)技術(shù)的微量化，有必要從凝膠中回收蛋白質(zhì)以用于制備抗體、免疫印跡、氨基酸組分分析或末端序列測(cè)定等。本產(chǎn)品就是專門為此用途開(kāi)發(fā)的微量蛋白膠回收法，它具有下列特點(diǎn)：
1.    簡(jiǎn)單，不需要復(fù)雜而昂貴的儀器（如電洗脫儀）。
2.    適用于變性膠（SDS-PAGE）和非變性膠。
3.    回收率一般在50-90%之間（跟蛋白質(zhì)大小，洗脫時(shí)間相關(guān)）。
4.    跟后續(xù)的實(shí)驗(yàn)兼容，包括2-D電泳、質(zhì)譜測(cè)序等。
規(guī)格及成分    成份    50次小盒包裝
（90402-50）
溶液A    10 mL
溶液B    50 mL
微型離心管研磨杵
（CAT：80603A）    50只
使用手冊(cè)    1份

運(yùn)輸及保存    常溫運(yùn)輸，4℃保存（微型離心管研磨杵可以室溫保存），有效期一年。
自備試劑    無(wú)
使用方法    1.    按常規(guī)方法進(jìn)行變性（SDS-PAGE）或非變性蛋白電泳。
2.    切取含目的蛋白的膠（盡可能地把多余的膠切除，否則會(huì)影響回收效率）。注意：固定和染色后蛋白回收效果很差，所以建議把樣品分多孔上樣，電泳后只切其中一個(gè)樣孔的膠條進(jìn)行固定和染色，然后將此膠條放回到在整體膠中原來(lái)的位置，通過(guò)顯色膠條上的蛋白條帶找到在未染色膠上對(duì)應(yīng)區(qū)域，并切下此區(qū)域的膠進(jìn)行回收。
3.    將切下的膠塊轉(zhuǎn)移到1.5 mL塑料離心管中。
4.    用研磨杵充分將膠塊壓磨成盡可能細(xì)小的碎片。
5.    加入200 uL溶液A，4℃搖晃洗脫至少2-16小時(shí)（過(guò)夜）。此時(shí)將溶液B放在冰箱預(yù)冷。
6.    10,000 g離心10分鐘，轉(zhuǎn)移上清到新的離心管中，注意不要吸取碎膠。
7.    加入5倍體積的預(yù)冷的溶液B，搖晃混勻。
8.    -20℃放置至少10-30分鐘。
9.    室溫12,000 g離心5-20分鐘，棄上清。
10.    室溫充分晾干，得到的沉淀即為回收的蛋白質(zhì)�；厥盏牡鞍踪|(zhì)可溶解在適當(dāng)?shù)木彌_液中，可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)（2-D電泳、質(zhì)譜測(cè)序等）。