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技術(shù)中心

人組織多肽抗原(TPA)ELISA試劑盒(Human TPA ELISA Kit)

2013年06月08日 21:57:27人氣:382來源:卡邁舒(上海)生物科技有限公司

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關(guān) 鍵 詞胰島素ELISA試劑盒,白介素17A elisa試劑盒,酶聯(lián)免疫技術(shù)支持,三氯生
【資料簡(jiǎn)介】

本試劑盒是基于酶聯(lián)夾心技術(shù)原理,測(cè)量人TPA,僅用于研究用途,不得用于醫(yī)學(xué)診斷。

【人組織多肽抗原(TPA)ELISA試劑盒工作原理】
組織多肽抗原( TPA) 是由腫瘤組織中純化出的一種不含糖和脂肪的單鏈多肽所組成的蛋白質(zhì),正常細(xì)胞和癌細(xì)胞均能分泌這類蛋白質(zhì),細(xì)胞處于增殖期時(shí)其分泌量增加。由于癌細(xì)胞分泌速率明顯高于正常細(xì)胞,因此癌癥病人血清中TPA 濃度升高。血清TPA 在各種類型肺癌病人中均見升高,無明顯組織特異性。近年國(guó)外研究顯示,治療前病人血清TPA 濃度與原發(fā)腫瘤的特性、淋巴結(jié)受累及轉(zhuǎn)移播散之間存在正相關(guān),并與預(yù)后密切相關(guān)。所提供的ELISA Kit是典型的夾心法酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定試劑盒(ELISA)。預(yù)先包被的抗體為多克隆抗體。檢測(cè)相抗體也為多克隆抗體,經(jīng)*(biotin)標(biāo)記。樣品和*標(biāo)記抗體先后加入酶標(biāo)板孔反應(yīng)后,PBS或TBS洗滌。隨后加入過氧化物酶標(biāo)記的親和素反應(yīng);經(jīng)過PBS或TBS的*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的待測(cè)因子呈正相關(guān)。
【人組織多肽抗原(TPA)ELISA試劑盒組成】(96T)

材料 數(shù)量
人TPA標(biāo)準(zhǔn)品 96T(2vial)
預(yù)包被人TPA抗體的96孔板 96T(8×12)
*標(biāo)記人TPA抗體 96T (1:100)
ABC(親和素-過氧化物酶復(fù)合物) 96T (1:100)
樣品稀釋液 96T×2
人TPA抗體稀釋液 96T×1
ABC稀釋液 96T×1
TMB顯色液A 96T×1
TMB顯色液B 96T×1
TMB終止液 96T×1
ELISA洗滌液 96T×1(1:25)

【需要而未提供的試劑和器材】
1. 37℃恒溫箱。
2. 標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀。
3. 自動(dòng)洗板機(jī)。
4. 單通道或多通道可調(diào)節(jié)移液器以及其吸頭。
5. 蒸餾水,容量瓶等
6. 干凈的試管和Eppendof管。

【注意事項(xiàng)】
1. 從-20℃取出的試劑盒,在4℃解凍過夜。盒內(nèi)每一瓶解凍的溶液在開啟瓶蓋之前都要輕輕搖勻,避免解凍時(shí)出現(xiàn)的分層,否則會(huì)出現(xiàn)濃度不均一的現(xiàn)象。
2. 開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。
3. 配制各種試劑時(shí),切記混勻!
4. 用戶在初次使用試劑盒時(shí),應(yīng)將各種試劑管離心數(shù)分鐘,以便試劑集中到管底。
5. 建議所有人TPA標(biāo)準(zhǔn)品、樣本都做雙份檢測(cè)。
6. 要嚴(yán)格避免操作過程中酶標(biāo)板干燥。干燥會(huì)使酶標(biāo)板上生物成份迅速失活!
7. 為免交叉污染,要避免重復(fù)使用手中的吸頭和試管。

【洗板方法】
手工洗板方法:吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體;在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上鋪墊幾層吸水紙,酶標(biāo)板朝下用力拍幾次;將推薦的PBS或TBS洗滌緩沖液至少0.35ml注入孔內(nèi),浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要,重復(fù)此過程數(shù)次。
自動(dòng)洗板:如果有自動(dòng)洗板機(jī),應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過程中。

【樣品的準(zhǔn)備和保存】
樣品如果不立即分析,應(yīng)分裝后冷凍保存,且避免反復(fù)凍融。
血清——用干凈試管收集血液,室溫凝固2小時(shí)或4℃過夜,離心1000×g 10分鐘,收集血清。立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。
細(xì)胞培養(yǎng)、組織勻漿、體液——離心去除沉淀,立即分析或分裝后-20℃冷凍保存。

【樣品稀釋的一般原則】
用戶須查閱文獻(xiàn)了解標(biāo)本內(nèi)待測(cè)因子的含量,決定適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù),以使稀釋后樣品中待測(cè)因子的濃度處于ELISA試劑盒的*檢測(cè)范圍。樣品的稀釋應(yīng)有詳細(xì)記錄。

【試劑的準(zhǔn)備和保存】
A. 人TPA標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋和使用:在使用前2小時(shí)內(nèi)準(zhǔn)備。將凍干品管內(nèi)加入1ml樣品稀釋液,*溶解后做倍比稀釋。
稀釋后的人TPA標(biāo)準(zhǔn)品在2小時(shí)內(nèi)使用。

B.*標(biāo)記人TPA抗體工作液:在使用前2小時(shí)內(nèi)準(zhǔn)備。
1. 根據(jù)每孔需要0.1ml計(jì)算總的用量(實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制0.1-0.2ml)。
2. 按10ul*標(biāo)記人TPA抗體加人TPA抗體稀釋液990ul的比例配制工作液。輕輕混勻。

C.親和素-過氧化物酶復(fù)合物(ABC)工作液的準(zhǔn)備:在使用前1小時(shí)內(nèi)準(zhǔn)備。
1. 根據(jù)每孔需要0.1ml計(jì)算總的用量(實(shí)配時(shí)應(yīng)多配制0.1-0.2ml)。
2. 按10ul親和素-過氧化物酶復(fù)合物(ABC)加ABC稀釋液990ul的比例配制工作液。輕輕混勻。

D. TMB顯色工作液的準(zhǔn)備:在使用之前30分鐘,按TMB顯色液A 9份加 TMB顯色液B 1份的比例配制TMB顯色工作液。

【操作程序】
1. 確定本次檢測(cè)所需的已包被人TPA抗體的酶標(biāo)板孔數(shù)目。
2. 將倍比稀釋的人TPA標(biāo)準(zhǔn)品各0.1ml依次加入一排7孔中,1孔只加樣品稀釋液的作為對(duì)照。處理后的標(biāo)本按100ul每孔加入。
3. 酶標(biāo)板加上蓋,37℃反應(yīng)90分鐘。
4. 反應(yīng)后用自動(dòng)洗板機(jī)吸去酶標(biāo)板內(nèi)的液體;或甩去酶標(biāo)板內(nèi)液體,再對(duì)著吸水紙拍幾下。洗滌2次。
5. 將準(zhǔn)備好的*人TPA抗體工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反應(yīng)60分鐘。
6. 0.01M TBS或0.01M PBS洗滌3次,每次浸泡1分鐘左右。
7. 將準(zhǔn)備好的ABC工作液按每孔0.1ml依次加入。37℃反應(yīng)30分鐘。
8. 0.01M TBS或0.01M PBS洗滌5次,每次浸泡1-2分鐘左右。
9. 按每孔0.1ml依次加入TMB顯色工作液,37℃避光反應(yīng),反應(yīng)過程中,要經(jīng)常的觀察,當(dāng)肉眼可見人TPA標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度藍(lán)色,后3-4孔差別不明顯時(shí),即可加入TMB終止液0.1ml/孔。(顯色反應(yīng)zui長(zhǎng)不要超過30分鐘)。
10. 用酶標(biāo)儀在450nm測(cè)定O.D.值。
11. 根據(jù)樣品的吸光值在坐標(biāo)上找出對(duì)應(yīng)的濃度。用戶也可以使用各種應(yīng)用軟件來計(jì)算。應(yīng)記住由于樣品稀釋了N倍,其實(shí)際濃度應(yīng)該×N。

【操作程序總結(jié)】:
準(zhǔn)備試劑,樣品和人TPA標(biāo)準(zhǔn)品

加入準(zhǔn)備好的樣品和人TPA標(biāo)準(zhǔn)品,37℃反應(yīng)90分鐘

洗板2次,加入*化人TPA抗體工作液,37℃反應(yīng)60分鐘

洗板3次,加入ABC工作液,37℃反應(yīng)30分鐘

洗板5次,加入TMB顯色液,37℃反應(yīng)

加入TMB終止液

30分鐘之內(nèi)讀OD值

計(jì)算標(biāo)本待測(cè)因子含量


【特異性】: 系統(tǒng)和其它細(xì)胞因子無交叉反應(yīng)。
【保存】: -20℃ [短期內(nèi)(如兩周)可4℃
【有效期】: 12個(gè)月(-20℃)。
【用途】: 用于體外定量分析液體標(biāo)本(通用型)。

我司專業(yè)提供人組織多肽抗原(TPA)ELISA試劑盒,更多產(chǎn)品詳情請(qǐng)?jiān)谙路搅粞曰虬l(fā)送郵件至我司kmsbio@,亦可或在線交談~~

卡邁舒(上海)生物科技有限公司作者

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