大腸桿菌質(zhì)粒DNA的提�。▔A裂解法）

【資料簡介】

 此方法適用于小量質(zhì)粒DNA 的提取提取的質(zhì)粒 DNA 可直接用于酶切PCR 擴(kuò)增 。
1. 取 1.5ml 細(xì)菌培養(yǎng)物于 EP 管中，4000rpm 離心 1 分鐘，棄上清液，使細(xì)菌沉 淀盡量干燥；
2. 將細(xì)菌沉淀重懸于用冰預(yù)冷的 100 µl 溶液 I （50 mmol/L 葡萄糖，10 mmol/L EDTA pH 8.0，25 mmol/L Tris-HCl pH 8.0） 中，劇烈振蕩；
3. 加入 200 µl 新配制的溶液 II（0.2 mol/L NaOH，1％SDS （m/v）），蓋緊 EP 管 口，快速顛倒離心管 5 次，以混合混合物，確保離心管的整個內(nèi)表面與溶液 II 接觸，不要渦旋，置于冰浴中；
4. 加入 150 µl 預(yù)冷溶液 III（每 100 ml 的溶液 III 中含 60 ml 5 mol/L 乙酸鉀，11 .5 ml 冰乙酸，28.5 ml H2O），蓋緊 EP 管口，反復(fù)顛倒數(shù)次，使溶液 III 在粘稠 的細(xì)菌裂解物中分散均勻，之后將管置于冰上 3~5 分鐘；
5. 在zui大轉(zhuǎn)速下離心 5min，取上清液于另一新 EP 管；
6. 用兩倍體積的乙醇室溫沉淀雙鏈 DNA，振蕩混合于室溫放置 2 分鐘，zui大轉(zhuǎn) 速離心 5 分鐘；
7.管壁的液滴除盡；
8. 加 1ml 70％乙醇洗滌沉淀，振蕩混合，用 12,000g 離心 2 分鐘，棄上清，將 開口的 EP 管置于室溫使乙醇揮發(fā)，直至 EP 管中內(nèi)沒有可見的液體存在（5～
10 分鐘），用適量的 ddH2O 溶解；
9. 用 0.5µl 的 RN ase 37℃溫育 5~10 分鐘；
10. 電泳鑒定。