兔分泌型免疫球蛋白A（sIgA）ELISA試劑盒使用說明書

【資料簡介】

 兔分泌型免疫球蛋白A（sIgA）酶聯(lián)免疫分析

試劑盒使用說明書

    本試劑盒僅供研究使用。

檢測范圍：                                                              96T

  150μg/L -4500μg/L

使用目的：
    本試劑盒用于測定兔血清、血漿及相關(guān)液體樣本中分泌型免疫球蛋白A（sIgA）含量。
實驗原理
    本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中兔分泌型免疫球蛋白A（sIgA）水平。用純化的兔
分泌型免疫球蛋白A（sIgA）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入
分泌型免疫球蛋白A（sIgA） ，再與HRP 標(biāo)記的分泌型免疫球蛋白A（sIgA）抗體結(jié)合，形成抗
體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)
化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的分泌型免疫球蛋白
A（sIgA）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品
中兔分泌型免疫球蛋白A（sIgA）濃度。
試劑盒組成

  1   30 倍濃縮洗滌液           20ml ×1 瓶      7    終止液                 6ml ×1 瓶

  2   酶標(biāo)試劑                6ml ×1 瓶       8    標(biāo)準(zhǔn)品（8000μg/L ） 0.5ml ×1 瓶

  3   酶標(biāo)包被板               12 孔×8 條       9    標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液              1.5ml×1 瓶

  4   樣品稀釋液               6ml ×1 瓶       10   說明書                 1 份

  5   顯色劑A 液              6ml ×1 瓶       11   封板膜                 2 張

  6   顯色劑B 液              6ml ×1/瓶       12   密封袋                 1 個

 

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標(biāo)本要求
    1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能
       馬上進(jìn)行試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
    2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP ）活性。
操作步驟
1.  標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀
    釋。

4000μg/L      5 號標(biāo)準(zhǔn)品          150μl 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

2000μg/L      4 號標(biāo)準(zhǔn)品          150μl 的5 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

1000μg/L      3 號標(biāo)準(zhǔn)品          150μl 的4 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

500μg/L       2 號標(biāo)準(zhǔn)品          150μl 的3 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

250μg/L        1 號標(biāo)準(zhǔn)品         150μl 的2 號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

2.  加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、
    待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，
    然后再加待測樣品10μl         （樣品zui終稀釋度為5 倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡
    量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3.  溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。
4.  配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用
5.  洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒后棄去，如此
    重復(fù)5 次，拍干。
6.  加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
7.  溫育：操作同3 。
8.  洗滌：操作同5。
9.  顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
    15分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。測定應(yīng)在加終止
    液后15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
操作程序總結(jié)：

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計算
    以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD             值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的
OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD 值計算出標(biāo)
準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，
即為樣品的實際濃度。
注意事項
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未
   用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2 ．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。
3 ．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間
   控制在5 分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
4 ．請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD 值
   大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測定，計
   算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
5 ．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
6 ．底物請避光保存。
7 ．嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8．所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9 ．本試劑不同批號組分不得混用。
10.  如與英文說明書有異，以英文說明書為準(zhǔn)。
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃。
2 ．有效期：6 個月

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