倉鼠卵巢細(xì)胞；TPO-CHO-I操作流程

【資料簡介】

                    倉鼠卵巢細(xì)胞；TPO-CHO-I操作流程

冷凍保存方法一：冷凍管置于4℃300分鐘→(-20℃30分鐘*)→-80℃16~18小時(或隔夜)→液氮槽儲存。

冷凍保存方法二：冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽期儲存。-20℃不可超過1小時，以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，也可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中，但存活率稍微降低一些。

 

操作步驟 　　1、將長滿細(xì)胞的培養(yǎng)瓶中原來的培養(yǎng)液棄去。 　

2、加入0.5—1ml 0.25%溶液，使瓶底細(xì)胞都浸入溶液中。 　　

3、瓶口塞好橡皮塞，放在倒置鏡下觀察細(xì)胞。隨著時間的推移，原貼壁的細(xì)胞逐漸趨于圓形，在還未漂起時將棄去，加入10ml培養(yǎng)液終止消化。 　　觀察消化也可以用肉眼，當(dāng)見到瓶底發(fā)白并出現(xiàn)細(xì)針孔空隙時終止消化。一般室溫消化時間約為1—3分鐘。 　

　4、用吸管將貼壁的細(xì)胞吹打成懸液，分到另外兩到三瓶中，實踐培養(yǎng)液塞好橡皮塞，置37℃下繼續(xù)培養(yǎng)。第二天觀察貼壁生長情況。