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中級(jí)會(huì)員 | 第14年

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標(biāo)準(zhǔn)品
培養(yǎng)基
培養(yǎng)基原料 霍亂弧菌診斷血清 大腸艾希氏菌診斷血清 志賀氏菌屬診斷血清 沙門(mén)氏菌屬診斷血清 標(biāo)準(zhǔn)血清,診斷血清 抗生素藥敏紙片 微生物配套試劑 微生物生化管 管裝培養(yǎng)基 即用型液體培養(yǎng)基 一次性培養(yǎng)基平板 顯色培養(yǎng)基 臨床培養(yǎng)基 菌種保存培養(yǎng)基 四環(huán)素檢定、厭氧亞硫酸鹽還原桿菌檢測(cè)培養(yǎng)基 維生素檢測(cè)培養(yǎng)基 一次性衛(wèi)生用品衛(wèi)生檢測(cè)培養(yǎng)基 罐頭食品商業(yè)無(wú)菌檢測(cè)培養(yǎng)基 飲用水及水源檢測(cè)培養(yǎng)基 藥品、生物制品檢測(cè)培養(yǎng)基 化妝品檢測(cè)培養(yǎng)基 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基 啤酒檢驗(yàn)培養(yǎng)基 軍團(tuán)菌檢測(cè)培養(yǎng)基 支原體檢測(cè)培養(yǎng)基 小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 彎曲桿菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 產(chǎn)氣莢膜梭菌、肉毒梭菌、厭氧菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 阪崎腸桿菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 溶血性鏈球菌檢測(cè)培養(yǎng)基 李斯特氏菌檢測(cè)培養(yǎng)基 弧菌檢測(cè)培養(yǎng)基 乳酸菌、雙歧桿菌檢測(cè)培養(yǎng)基 酵母、霉菌檢測(cè)培養(yǎng)基 檢測(cè)培養(yǎng)基 沙門(mén)氏菌、志賀氏菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 大腸菌群、糞大腸菌群、大腸桿菌及腸桿菌科檢測(cè)培養(yǎng)基 細(xì)菌總數(shù)檢測(cè),增菌培養(yǎng)基
抗體
生物試劑
細(xì)胞
菌株
血清
細(xì)胞分離試劑
試劑盒

細(xì)胞中的微絲染色及微絲與細(xì)胞形態(tài)的觀察實(shí)驗(yàn)

時(shí)間:2017-2-6閱讀:1668
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【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?nbsp;
掌握微絲的染色方法,了解光學(xué)顯微鏡和電子顯微鏡下微絲的基本形態(tài)結(jié)構(gòu)。 
【實(shí)驗(yàn)用品】 
一、材料和標(biāo)本 蓋片培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞三片。 
二、器材和儀器 光學(xué)顯微鏡一臺(tái)、鑷子一把、小平皿六個(gè)、載片三個(gè)、吸水紙、37℃恒溫箱。 
三、試劑 PBS(pH7.2)、2%Triton X—100液、M—緩沖液、3%戊二醛固定液、0.2%考馬斯亮蘭染液、100μg/ml的細(xì)胞松馳素B、Dmem培養(yǎng)液。 
【實(shí)驗(yàn)內(nèi)容】 
一、成纖維細(xì)胞微絲的染色及其對(duì)細(xì)胞松馳素B的反應(yīng) 
(一)原理 
微絲普遍存在于多種細(xì)胞,對(duì)細(xì)胞的形狀和運(yùn)動(dòng)有一定作用。細(xì)胞松馳素B可與微絲的亞單位肌動(dòng)蛋白結(jié)合,從而破壞微絲,改變細(xì)胞的形狀。 
(二)細(xì)胞松馳素B處理成纖維細(xì)胞與染色觀察 
1.在平皿中有三張成纖維細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)的蓋片,在超凈工作臺(tái)內(nèi)將一張蓋片移入另一皿中繼續(xù)培養(yǎng),用作對(duì)照。 
2.在有兩片的平皿內(nèi)加100μg/ml的細(xì)胞松弛素B 4滴繼續(xù)培養(yǎng)半小時(shí)。 
3. 將用細(xì)胞松弛素B處理過(guò)的兩張蓋片取一張做染色處理,另一張用培養(yǎng)液洗五次(在平皿內(nèi)換五次培養(yǎng)液,每次都要搖動(dòng)),繼續(xù)培養(yǎng)、觀察。兩小時(shí)后細(xì)胞形狀恢復(fù),接近正常。 
4.對(duì)恢復(fù)的蓋片與*張沒(méi)用藥的蓋片一同做染色處理。 
5.染色處理 
①將需染色的蓋片放入盛有PBS的平皿內(nèi)用吸管輕輕吹洗蓋片,換液三次,每次3分鐘,洗去培養(yǎng)液。 
②將蓋片移入2%Triton X一100液,置37℃恒溫箱內(nèi)處理20~30分鐘,以提取骨架以外的蛋白質(zhì),使骨架圖像清晰。 
③立刻將蓋片移入M一緩沖液,換洗三次,每次3分鐘。M一緩沖液有穩(wěn)定細(xì)胞骨架的作用。 
④將蓋片移入3%戊二醛固定15分鐘。 
⑤將蓋片移入0.2%考馬斯亮蘭染液中,染色15分鐘。然后小心地用自來(lái)水沖洗,空氣干燥。 
(三)結(jié)果 
光鏡觀察,微絲聚集成的張力纖維束被染成藍(lán)色。在沒(méi)用藥的標(biāo)本上,成纖維細(xì)胞多數(shù)有突起,微絲沿突起規(guī)則排列;用細(xì)胞松馳素B處理的標(biāo)本,由于微絲被破壞突起縮回,多數(shù)細(xì)胞形狀變圓;用藥處理后又洗去藥的標(biāo)本,由于解除了藥的作用,肌動(dòng)蛋白重新聚臺(tái)形成微絲,細(xì)胞形狀恢復(fù)正常。 
二、麗藻細(xì)胞內(nèi)胞質(zhì)環(huán)流及其對(duì)細(xì)胞松弛素B的反應(yīng) 
(一)原理 
麗藻細(xì)胞大,整個(gè)細(xì)胞的為大液泡占據(jù)??拷号菔且粚尤苣z樣流動(dòng)的內(nèi)質(zhì),在內(nèi)質(zhì)與質(zhì)膜之間,為靜止的外質(zhì),其中含有葉綠體。內(nèi)質(zhì)中含有許多顆粒,可以清楚地看到胞質(zhì)環(huán)流。在麗藻細(xì)胞中的微絲與胞質(zhì)環(huán)流有密切關(guān)系。成束的微絲出現(xiàn)在外質(zhì)與內(nèi)質(zhì)接口(溶膠和凝膠接口)并交織一起,與環(huán)流方向平行。用細(xì)胞松弛素B處理后,就可抑制胞質(zhì)的環(huán)流運(yùn)動(dòng)。 
(二)方法 
1.剪下一小塊麗藻葉片(1~2cm),置于載片上,蓋上蓋片。 
2.觀察(陽(yáng)光充足時(shí)效果較好)。 
3.再取一塊麗藻葉片,滴一滴細(xì)胞松弛素B,10~15分鐘后蓋上蓋片,觀察。 
4.洗去藥物,再觀察。 
(三)結(jié)果 
在麗藻內(nèi)質(zhì)中可以看到胞質(zhì)環(huán)流,用細(xì)胞松弛素B處理后,胞質(zhì)環(huán)流停止,洗去藥物,又出現(xiàn)胞質(zhì)環(huán)流。 
三、微絲的電鏡照片觀察 
恒河猴脊髓內(nèi)神經(jīng)纖維中微絲電鏡照片,可見(jiàn)微絲是實(shí)心結(jié)構(gòu),直徑5~8cm,它均勻地分散于細(xì)胞基質(zhì)中,或排列成束和網(wǎng)狀。

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