本試劑盒僅供科研使用 

 原果膠含量試劑盒說明書 

（貨號：WS3070F 分光法 48 樣）

一、產(chǎn)品簡介： 果膠是構(gòu)成細(xì)胞初生壁和中膠層的主要成分，主要由原果膠、果膠酸甲酯和果膠酸等 形式廣泛分布于植物果實(shí)、根莖和葉中。果膠和纖維素以及金屬離子等物質(zhì)相結(jié)合形成不 溶于水的原果膠，他的存在使果實(shí)顯得堅(jiān)實(shí)、脆硬。 本試劑盒先提取得到原果膠，采用咔唑比色法測定原果膠含量。原果膠在稀酸中水解 為可溶性果膠，并進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為半乳糖醛酸，在硫酸溶液中與咔唑進(jìn)行縮合反應(yīng)，生成紫 紅色物質(zhì)，經(jīng)光譜掃描該物質(zhì)在 530nm 處有最大吸收峰，顏色深淺與果膠含量成正比， 進(jìn)而得原果膠含量。 二、試劑盒組成和配制： 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 備注 提取液 液體 60 mL×1 瓶 4℃保存 試劑一 液體 1.5mL×1 支 4℃保存 標(biāo)準(zhǔn)品 粉劑 mg×1 支 4℃保存 若重新做標(biāo)曲，則用到該試劑 三、所需的儀器和用品： 可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿（光徑 1cm）、水浴鍋、可調(diào)式移液器、乙醇、濃硫 酸、研缽。 四、原果膠含量測定： 建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個樣本做預(yù)測定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí)驗(yàn) 樣本和試劑浪費(fèi)！ 1、樣本制備： 1 取 0.1g 組織（烘干且過篩后的粉末組織可取 0.01g），加 1.5mL 的 80%乙醇，研磨勻 漿，85℃水浴 10min（及時(shí)補(bǔ)充 80%乙醇至 1mL），取出流水冷卻后，8000rpm，25℃ 離心 10min，棄上清，留沉淀， 2 向沉淀中加入 1mL 的 80%乙醇，混勻，85℃水浴 10min（及時(shí)補(bǔ)充 80%乙醇至 1mL）， 取出流水冷卻后，8000rpm，25℃離心 10min，棄上清，留沉淀。 ③ 再向沉淀中加入 1 mL 蒸餾水，混勻，50℃水浴 30min,流水冷卻至室溫，8000rpm，25℃ 離心 10min，棄上清，留沉淀。 ④ 向沉淀中加入 1mL 提取液，混勻，95℃水浴 60min，流水冷卻至室溫，8000rpm，25℃ 離心 10min，取上清液待測。 2、上機(jī)檢測： ① 分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長為 530nm，蒸餾水調(diào)零。 ② 可取兩個樣本做適當(dāng)梯度的稀釋（如 4 倍，即 1 份上清液+3 份蒸餾水），確定 適合本次實(shí)驗(yàn)的稀釋倍數(shù) D。 ③ 在 EP 管中依次加入： 試劑名稱 （µL） 測定管 空白管 （僅做一次） 樣本 105 蒸餾水 105 濃硫酸 630 630 可用封口膜纏緊，85℃水浴 15min 后，本試劑盒僅供科研使用 2 流水冷卻至室溫。 試劑一 21 21 混勻，室溫（25℃）暗處反應(yīng) 30min（間隔 10min 混勻一次），全部液體轉(zhuǎn)移至 1mL 玻璃比色皿中， 于 530nm 處讀取吸光值 A，△A=A 測定-A 空白。 【注】：1、濃硫酸必須是分析純級別，且不能長期開口放置，否則影響顯色結(jié)果。另外濃硫酸具有 強(qiáng)腐蝕性，操作時(shí)需特別注意，85℃加熱取出后冷卻再打開蓋子，以防液體飛濺燒傷。 2、顯色反應(yīng)必須在暗處反應(yīng)，否則顏色很快消失或者變淡，影響吸光值。 3、若 A 測定管值大于 1.8，可用蒸餾水稀釋樣本即待檢測上清液，則稀釋倍數(shù) D 需代入公 式計(jì)算；或若 A 值再零附近可增加樣本取樣質(zhì)量 W。 五、結(jié)果計(jì)算： 1、標(biāo)準(zhǔn)曲線方程：y = 2.6619x-0.0141；，x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL），y 是△A。 2、原果膠含量(mg /g 重量) =[(ΔA+0.0141) ÷2.6619×V1]÷ (W×V1÷V)×D =0.37×(ΔA+0.0141)÷W W---樣本重量，g； V---加入提取液體積，1mL； V1---加入樣本體積，0.105mL； D---稀釋倍數(shù)。 附：標(biāo)準(zhǔn)曲線制作過程： 1 制備標(biāo)準(zhǔn)品母液（0.5mg/mL）：臨用前向標(biāo)準(zhǔn)品中加入 2mL 蒸餾水（現(xiàn)配現(xiàn)用）。 2 把母液用蒸餾水稀釋成六個濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)品：0，0.1，0.2，0.3，0.4，0.5. mg/mL。 也可根據(jù)實(shí)際樣本來調(diào)整標(biāo)準(zhǔn)品濃度。 3 依據(jù)測定管的加樣表操作，根據(jù)結(jié)果即可制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。