兔p物質(zhì)(SP) ELISA試劑盒正式試驗時,應分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件,待檢祥品應作一式二份,以保證實驗結(jié)果的雉確性。有時本底較高,說明有非特異性反應
采用羊血清、兔血清或BSA等封閉
1)固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等◇其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。當前常用的是40孔
聚苯乙烯凹孔板●不管何種載體,在使用前均可進行篩選:用等里抗原包被,在同一實驗條件下進行反應,觀察其顯色反應是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能
2)包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時,要求純度要好,吸附時-般要求門在9σ~96之間∝吸附溫度,時間及其蛋白里也
有一定影向,一般多采用
即用不同
司的蛋白質(zhì)濃度(01、10和10gm等)進行包被后,在其它試驗條件
相同時,觀察陽性標本的D值。選擇OD值*而蛋白里少的衣度。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1~10gm
3)繭標記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELsA法進行初步效價的滴定(見酶標記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取方陣法"(包被物、待檢樣品的
參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗系統(tǒng)里準確地滴定其工作濃度·
)酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地旵色反應,而本身無色。有些供氫體(如○PD等)有潛在的致癌作用,應注意防
護。有條件者應使用不致癌、靈敏度高的供氨體,如TM和ABTs是當前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后,應加入強醱或強堿以終止反應。通常底物作