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上海莼試生物技術(shù)有限公司

國(guó)產(chǎn)elisa試劑盒的基本原理、應(yīng)用及方法和類(lèi)型

時(shí)間:2018-2-8閱讀:402
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國(guó)產(chǎn)elisa試劑盒的基本原理有三條: 
    (1)抗原或抗體能以物理性地吸附于固相載體表面,可能是蛋白和聚苯乙烯表面間的疏水性部分相互吸附,并保持其免疫學(xué)活性;
    (2)抗原或抗體可通過(guò)共價(jià)鍵與酶連接形成酶結(jié)合物,而此種酶結(jié)合物仍能保持其免疫學(xué)和酶學(xué)活性; 
    (3)酶結(jié)合物與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合后,可根據(jù)加入底物的顏色反應(yīng)來(lái)判定是否有免疫反應(yīng)的存在,而且顏色反應(yīng)的深淺是與標(biāo)本中相應(yīng)抗原或抗體的量成正比例的,因此,可以按底物顯色的程度顯示試驗(yàn)結(jié)果。
    ELISA法是免疫診斷中的一項(xiàng)新技術(shù),現(xiàn)已成功地應(yīng)用于多種病原微生物所引起的傳染病、寄生蟲(chóng)病及非傳染病等方面的免疫診斷。也已應(yīng)用于大分子抗原和小分子抗原的定量測(cè)定,根據(jù)已經(jīng)使用的結(jié)果,認(rèn)為ELISA法具有靈敏、特異、簡(jiǎn)單、快速、穩(wěn)定及易于自動(dòng)化操作等特點(diǎn)。不僅適用于臨床標(biāo)本的檢查,而且由于一天之內(nèi)可以檢查幾百甚至上千份標(biāo)本,因此,也適合于血清流行病學(xué)調(diào)查。本法不僅可以用來(lái)測(cè)定抗體,而且也可用于測(cè)定體液中的循環(huán)抗原,所以也是一種早期診斷的良好方法。因此ELISA法在生物醫(yī)學(xué)各領(lǐng)域的應(yīng)用范圍日益擴(kuò)大,可概括四個(gè)方面: 1、免疫酶染色各種細(xì)胞內(nèi)成份的定位。 2、研究抗酶抗體的合成。 3、顯現(xiàn)微量的免疫沉淀反應(yīng)。 4、定量檢測(cè)體液中抗原或抗體成份。
    方法一 用于檢測(cè)未知抗原的雙抗體夾心法: 
1. 包被:用0.05M PH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1~10μg/ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml,4℃過(guò)夜。次日,棄去孔內(nèi)溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡(jiǎn)稱(chēng)洗滌,下同)。 
2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí)。然后洗滌。(同時(shí)做空白孔,陰性對(duì)照孔及陽(yáng)性對(duì)照孔)。 
3. 加酶標(biāo)抗體:于各反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.5~1小時(shí),洗滌。 
4. 加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分鐘。 
5. 終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。 
6. 結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽(yáng)性程度越強(qiáng),陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號(hào)表示。也可測(cè)O·D值:在ELISA檢測(cè)儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔O·D值,若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍,即為陽(yáng)性。
    方法二 用于檢測(cè)未知抗體的間接法: 
用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml, 每孔加0.1ml,4℃過(guò)夜。次日洗滌3次。 
↓ 
加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌。(同時(shí)做空白、陰性及陽(yáng)性孔對(duì)照) 
↓ 
于反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.1ml,37℃孵育30-60分鐘,洗滌,zui后一遍用DDW洗滌。 
↓ 
國(guó)產(chǎn)elisa試劑盒其余步驟同“雙抗體夾心法”的4、5、6。
YM瓊脂    進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)    YM Agar    用于霉菌、酵母菌及耐酸菌的分離培養(yǎng)(Acumedia方法)    250
YM11瓊脂    進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)    YM11 Agar    濾膜法用于霉菌、酵母菌的分離培養(yǎng)(NEOGEN方法)    250
OGY瓊脂    進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)    OGY Agar    用于霉菌和酵母菌分離培養(yǎng)和計(jì)數(shù)(Merck方法)    250
WL營(yíng)養(yǎng)瓊脂    進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)    WL Nutrient Agar    用于啤酒和發(fā)酵產(chǎn)品中酵母菌和細(xì)菌的計(jì)數(shù)    250
改良沙氏瓊脂培養(yǎng)基       進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)    Sabouraud’s Agar,Modified    用于真菌檢測(cè)    250
沙氏BHI瓊脂    進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)    Sabouraud BHI Agar    用于真菌檢測(cè)(Acumedia 方法)    250
菌種培養(yǎng)基          進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)    Strain Medium(for B.Cereus)    用于四環(huán)素檢定中蠟樣芽孢桿菌的培養(yǎng)(SN標(biāo)準(zhǔn))    250
四環(huán)素檢定瓊脂        進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)    Tetracyline Examination Agar    用于四環(huán)素殘留的微生物學(xué)檢定(SN標(biāo)準(zhǔn))    250
葡萄糖胰蛋白胨瓊脂    進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)    Glucose Tryptone Agar    用于嗜熱菌芽孢(需氧芽孢總數(shù)、平酸芽孢和厭氧芽孢)分離培養(yǎng)(SN標(biāo)準(zhǔn))    250
布氏瓊脂       進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)    Brucella Agar    用于彎曲桿菌分離(SN標(biāo)準(zhǔn))    250
國(guó)產(chǎn)elisa試劑盒

 

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