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上海莼試生物技術(shù)有限公司

進(jìn)口檢測(cè)試劑盒對(duì)DNA合成常見(jiàn)問(wèn)題及解答

時(shí)間:2017-7-25閱讀:345
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Q: 進(jìn)口檢測(cè)試劑盒怎樣對(duì)合成DNA制品進(jìn)行定量?
A: DNA的量與260 nm處的吸光度值(OD值)成正比,因此使用紫外分光光度計(jì)定量是zui科學(xué)的。1個(gè)OD值的合成DNA的重量約為33 mg。
Q: 怎樣理解測(cè)定的OD值?
A: 進(jìn)行OD值測(cè)定時(shí),分光光度計(jì)上顯示的數(shù)值為每毫升溶液中的OD值。當(dāng)測(cè)定200 ml溶液中的OD值為1.5時(shí),溶液整體的OD量應(yīng)該為多少?此時(shí)的OD值 
= 1.5 OD/ml × 0.2 ml = 0.3 OD。
Q: 合成oligo DNA應(yīng)怎樣保存?
A: 保存合成的Oligo應(yīng)該注意以下幾點(diǎn): 
1. 干燥制品很穩(wěn)定,常溫下數(shù)個(gè)月無(wú)問(wèn)題。但為保證*,放置于-20℃保存為好。
2. 溶解后的溶液DNA短期內(nèi)(1-2周)使用可放置在4℃下保存,長(zhǎng)期保存請(qǐng)放置于-20℃。溶解DNA時(shí),請(qǐng)注意使用無(wú)菌、無(wú)核酸酶的水或TE Buffer。
3. 熒光標(biāo)記引物請(qǐng)避光保存。
Q: 合成DNA溶液在室溫下放置了數(shù)天,還可以使用嗎?
A: 溶液中的Oligo DNA常溫下數(shù)天(3-4天)應(yīng)該沒(méi)問(wèn)題,但不要放置一個(gè)星期以上。其壽命受溶液中的菌體、核酸酶等的影響。
Q: 制品溶解后發(fā)現(xiàn)有少許沉淀,會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果嗎?
A: 所有的制品純化后都要進(jìn)行脫鹽,脫鹽是使用C18柱進(jìn)行的,偶而會(huì)有微量的樹(shù)脂溢出而進(jìn)入制品。樹(shù)脂不影響任何反應(yīng)結(jié)果,請(qǐng)稍許離心后取上清使用。 
Q: 測(cè)定了制品的OD值后發(fā)現(xiàn)A260/A280< 1.8,制品質(zhì)量(純度)合格嗎?
A: Oligo DNA和一般提取的雙鏈DNA不同,A260/A280的比值不能準(zhǔn)確衡量Oligo 
DNA制品的質(zhì)量,該比值依賴于序列中的各種堿基的組份,下表中列出了不同堿基組成的20mer的Oligo DNA的A260/A280比值。
因此,如果您測(cè)定了A260/A280的比值小于1.8時(shí),是由于進(jìn)口檢測(cè)試劑盒上述原因引起的。
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