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上海仁捷生物科技有限公司

魚*酸合成酶(IMPS)ELISA試劑盒檢測靈敏度

時間:2018-11-1閱讀:490
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魚*酸合成酶(IMPS)ELISA試劑盒檢測靈敏度

本試劑僅供研究使用       目的:本試劑盒用于測定魚體液、腔液、組織勻漿及相關(guān)液體樣本中*酸合成酶(IMPS)的活性。

實驗原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本魚*酸合成酶(IMPS)水平。用純化的魚*酸合成酶(IMPS)捕獲抗體包被微孔板,制成固相體,往包被的微孔中依次加入魚*酸合成酶(IMPS),再與HRP標記的檢測抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的魚*酸合成酶(IMPS)呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品魚*酸合成酶(IMPS)活性。

操作步驟

  1. 標準品的加樣:設(shè)置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;
  2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
  3. 加酶:每孔加入酶標試劑100μl,空白孔除外。
  4. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘
  5. 配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。
  6. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
  7. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
  8. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
  9. 測定:以空白孔調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值) 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

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