細(xì)菌亞硝酸鹽還原酶定性檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品說(shuō)明書

主要用途

細(xì)菌亞硝酸鹽還原酶定性檢測(cè)試劑是一種旨在通過(guò)底物亞硝酸鹽，在亞硝酸鹽還原酶的催化作用下，產(chǎn)生氨或一氧化氮，進(jìn)而使用使用磺胺酸和N,N-二甲基-1-萘胺，呈現(xiàn)無(wú)色反應(yīng)，來(lái)定性分析細(xì)菌樣品中亞硝酸鹽還原酶活性的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種細(xì)菌樣品中亞硝酸鹽還原酶活性的定性檢測(cè)。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌，即到即用，操作簡(jiǎn)捷，性能穩(wěn)定，重復(fù)性好。

技術(shù)背景

亞硝酸鹽還原酶（nitrite reductase；NiR）是一類催化亞硝酸鹽還原為氨或一氧化氮的還原反應(yīng)的酶，其分成同化型（assimilatory）和異化型（dissimilatory）亞硝酸還原酶，在生物氮循環(huán)進(jìn)行厭氧能量代謝中起著重要作用。同化型酶以鐵氧還原蛋白、FAD、非血紅素鐵、西羅血紅素（siroheme）、NAD（P）H等為電子供體，進(jìn)行6個(gè)電子的還原產(chǎn)生氨（ammonification），包括高等植物、綠藻及藍(lán)藻、粗糙脈孢菌（Neur-ospora crassa）、和大腸埃希氏菌（Escherichia coli）等。異化型酶參與使用亞硝酸氧化有機(jī)物質(zhì)的過(guò)程，包括單電子反應(yīng)生成NO和6個(gè)電子的還原產(chǎn)生氨。其脫氮作用是細(xì)菌或真菌等獲得能量、適應(yīng)環(huán)境生存的生理過(guò)程。脫氮細(xì)菌、真菌或植物的亞硝酸還原酶有二種：銅型和鐵型。銅型（CuNiR）含有類似于銅藍(lán)蛋白（azurin）的銅中心部位，銅藍(lán)蛋白為電子供體；鐵型（ccNiR）含有同源雙體，包括c型和d1型細(xì)胞色素結(jié)構(gòu)域，細(xì)胞色素C為電子供體。亞硝酸鹽在食品工業(yè)中用于色素、調(diào)味和防止氧化，還用于蔬菜發(fā)酵，但是它具有致畸（tetragenic）和致癌作用（carcinogenic），會(huì)引起高鐵血紅蛋白血癥（methemoglobinemia）。基于底物亞硝酸鹽（nitrite），通過(guò)亞硝酸鹽還原酶（nitrite reductase；NiR）的催化作用，而還原為氨或一氧化氮，進(jìn)而使用磺胺酸（sulfanilic acid）和N,N-二甲基-1-萘胺（N, N dimethyl-1-naphthylamine），呈現(xiàn)無(wú)色反應(yīng)，而對(duì)照顯示紅色，來(lái)定性分析亞硝酸鹽還原酶的活性。

產(chǎn)品內(nèi)容

培養(yǎng)液（Reagent A） 毫升

反應(yīng)液（Reagent B） 毫升

顯色液（Reagent C） 毫升

產(chǎn)品說(shuō)明書 1份

保存方式

保存在4℃冰箱里；顯色液（Reagent C）避免光照；反應(yīng)液（Reagent B）具有腐蝕性，注意操作安全；有效保證3月

用戶自備

15毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器

恒溫培養(yǎng)箱：用于細(xì)菌培養(yǎng)

實(shí)驗(yàn)步驟

• 準(zhǔn)備好2個(gè)15毫升錐形離心管，標(biāo)記為：背景對(duì)照和待測(cè)樣品
• 分別移取xx毫升培養(yǎng)液（Reagent A）到15毫升錐形離心管
• 接種用戶自備的待測(cè)細(xì)菌樣品到待測(cè)樣品管
• 放進(jìn)35℃培養(yǎng)箱孵育48小時(shí)（注意：少量菌種可以延長(zhǎng)孵育至5天）
• 加入xx微升反應(yīng)液（Reagent B），混勻
• 加入xx微升顯色液（Reagent C），混勻
• 觀察2分鐘
• 結(jié)果：

注意事項(xiàng)

• 本產(chǎn)品為20次操作
• Veillonellae、Haemophili、Staphylococci、Corynebacteria、Lactobacilli、Flavobacteria、Fusobacteria、Enterobacteriaceae、Neisseria spp、Leuconostoc等亞硝酸還原酶陽(yáng)性
• 操作時(shí)，須戴手套
• 操作時(shí)，嚴(yán)格無(wú)菌，避免污染母液
• 反應(yīng)液（Reagent B）具有腐蝕性，注意操作安全
• 樣品中避免含有各種還原性化學(xué)物質(zhì)，包括巰基乙醇（2-mercaptoethanol）、二硫蘇糖醇（dithiothreitol；DTT）、維生素C（ascorbic acid）和*（azide）等
• 與背景對(duì)照測(cè)定顯示紅色相比，待測(cè)樣品呈現(xiàn)無(wú)色，表明具有酶活性
• 本公司提供系列亞硝酸鹽還原酶分析試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定檢測(cè)敏感