單克隆抗體雙夾心ELISA檢測偽狂犬病病毒的研究

用純化的Min-A株偽狂犬病 病毒（PRV）免疫兔子和昆明鼠，制備高免血清并提純IgG。兔抗PRV高免血清瓊擴(kuò)效價為1：32，純化兔抗PRV IgG蛋白含量為7.34mg/ml；鼠抗PRV高免血清瓊擴(kuò)效價為1：16，純化鼠抗PRV IgG蛋白含量為5.74mg/ml。 復(fù)蘇本實驗室研制并保存的分泌抗偽狂犬病病毒單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞OH6，按常規(guī)方法制備腹水、提純IgG，并重新對其作了鑒定。該雜交瘤細(xì)胞的平均染色 體數(shù)目為94條；建立了檢測單抗的間接ELISA方法，雜交瘤細(xì)胞培養(yǎng)上清和腹水單克隆抗體的ELISA效價分別為1：1000和1：200000；該株 單抗在有無補體參與下均具有中和活性，中和效價分別為1:64和1:16；該株單抗具有良好的特異性，與PRRSV、HCV、PPV不發(fā)生交叉反應(yīng)。 利用所制備的兔抗PRV IgG和McAb建立了檢測PRV的“單克隆抗體雙夾心ELISA”。兔抗PRV IgG包被濃度為4.59ug/ml（1：1600倍稀釋），McAb的工作濃度為6.45ug/ml（1：800稀釋）。該檢測方法特異、靈 敏、可靠、方便、快捷；與動物試驗、病毒分離和中和試驗符合率較高；zui低病毒檢出量為200ng/ml；整個操作過程僅需4.5h（不包括包被）；建立了 科學(xué)的判定標(biāo)準(zhǔn)；該方法不需要特殊設(shè)備和技術(shù)，便于推廣。通過對人工兔病料和自然發(fā)病豬病料的檢測研究，發(fā)現(xiàn)扁桃體和腦是PRV檢測器官。