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小鼠淋巴細(xì)胞趨化因子(Lptn)elisa試劑盒代測(cè)

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更新時(shí)間:2015-12-07 10:57:12瀏覽次數(shù):139次

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潤裕生物小鼠淋巴細(xì)胞趨化因子(Lptn)elisa試劑盒代測(cè)ELISA試劑盒產(chǎn)品常見技術(shù)指南:

1、選擇抗體時(shí)選擇一個(gè)單抗和一個(gè)多抗進(jìn)行配對(duì);若選擇兩個(gè)單抗,必須識(shí)別不同表位的抗體;從同一家公司選擇抗體對(duì)。

2、ELISA實(shí)驗(yàn)中為了確定好的信號(hào)和zui低背景應(yīng)將捕獲抗體(0.5-4μg/ml)和檢測(cè)抗體(0.25-2μg/ml)在預(yù)實(shí)驗(yàn)中進(jìn)行彼此相抗的滴定。同時(shí),應(yīng)包括在適當(dāng)范圍內(nèi)的標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋。按試劑說明書常規(guī)提供的范圍進(jìn)行操作。

3、標(biāo)準(zhǔn)品的配制:對(duì)于每種細(xì)胞因子應(yīng)仔細(xì)閱讀說明書,注意每批的細(xì)節(jié)。在使用細(xì)胞因子前,瞬時(shí)離心試劑瓶,盡可能多地收回其中的細(xì)胞因子。根據(jù)每批說明書中的細(xì)節(jié),將凍干的細(xì)胞因子復(fù)溶。

4、一般待測(cè)抗原標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍的可通過將標(biāo)準(zhǔn)品做82倍系列稀釋從2000pg/ml 15pg/ml??衫脴?biāo)準(zhǔn)的ELISA操作流程、放大試劑盒、第三類試劑、或改變酶底物系統(tǒng)可在一定范圍內(nèi)提高靈敏度。

5、為了優(yōu)化靈敏度,建議過夜孵育標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本。

6、若使用過氧化物酶作為顯色系統(tǒng),應(yīng)嚴(yán)禁在洗液和稀釋液中加疊氮鈉,疊氮鈉可抑制過氧化物酶的活性。

7、當(dāng)測(cè)定混合液體中的抗原時(shí),如血清,建議在標(biāo)本稀釋液中加不相干的Ig。

目前市場(chǎng)上,小鼠淋巴細(xì)胞趨化因子(Lptn)elisa試劑盒代測(cè)ELISA試劑盒產(chǎn)品既有國產(chǎn)也有進(jìn)口,數(shù)量繁多令人目不暇接,怎樣才能選出zui適用的產(chǎn)品呢?首先當(dāng)然得根據(jù)我們所要檢測(cè)的分子進(jìn)行檢測(cè),除此以外也還有一些需要加以考量的因素。

1. 抗體類型

單克隆抗體和多克隆抗體都能夠用于ELISA,實(shí)際上有時(shí)候二者結(jié)合效果更好。例如,對(duì)于雙抗夾心法而言,用多抗進(jìn)行捕獲而單抗進(jìn)行檢測(cè)有時(shí)更有幫助。多抗能夠確保捕獲所有抗原,隨后單抗再特異性檢測(cè)擁有特定抗原表位的抗原。

雙抗夾心法ELISA中捕獲抗體與檢測(cè)抗體(不論多抗還是單抗)的配對(duì)很有講究。我們不希望捕獲抗體與檢測(cè)抗體競(jìng)爭(zhēng)抗原上的同一位點(diǎn),為此我們就需要確保捕獲抗體和檢測(cè)抗體所識(shí)別的抗原表位不存在重疊。如果捕獲抗體和檢測(cè)抗體之間發(fā)生了沖突,就會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生較大影響。要避免這一問題,我們可以選擇購買“matched pair"的捕獲/檢測(cè)抗體對(duì),這些打包在一起的抗體是商家經(jīng)過驗(yàn)證才*的好組合。

2. 實(shí)驗(yàn)類型

ELISA試劑盒有多種類型,不過它們都有一個(gè)共同特點(diǎn),就是進(jìn)行抗原捕獲。一般捕獲形式包括將抗原吸附到微孔板或者用微孔板上的抗體進(jìn)行捕獲。In-cell ELISA和酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)ELISPOT是兩種特殊的類型,In-cell ELISA需要將微孔板中培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行固定和通透化,然后再用抗體原位檢測(cè)。ELISPOT有點(diǎn)像蛋白印跡Western blot,先在帶膜的微孔板中培養(yǎng)細(xì)胞,然后在膜上檢測(cè)細(xì)胞分泌的抗原形成斑點(diǎn)。此外,還需要根據(jù)自身需要選擇96孔板或是384孔板進(jìn)行ELISA實(shí)驗(yàn)。

通常人們使用雙抗夾心法進(jìn)行ELISA實(shí)驗(yàn),雙抗夾心法中抗原被夾在捕獲抗體和檢測(cè)抗體之間,這種方法既靈敏又有效,受到了許多研究者的青睞。不過有時(shí)候雙抗夾心法并不是通用的選擇,例如有時(shí)候抗原特別小讓兩個(gè)大抗體難以附著,又或者抗體只有一個(gè)抗體結(jié)合位點(diǎn)。在上述情況下,競(jìng)爭(zhēng)性ELISA就更為適用,這種方法是采用帶標(biāo)記的純化抗原與樣本中無標(biāo)記的抗原進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng),以結(jié)合捕獲抗體。

3. 檢測(cè)方式

如今檢測(cè)ELISA有許多途徑,我們可以根據(jù)自己的偏好進(jìn)行選擇。一般ELISA檢測(cè)的是酶促反應(yīng)的可溶性產(chǎn)物,抗體上結(jié)合有相應(yīng)的酶(例如通常使用的辣根過氧化物酶HRP),而反應(yīng)體系中添加有相應(yīng)的底物(如33-二氨基聯(lián)苯胺DAB)。這種酶促反應(yīng)生成具有特征性的顏色,可以通過分光光度計(jì)進(jìn)行檢測(cè),堿性磷酸酶AP也是一種常用酶。酶可以結(jié)合在一抗上,也可以結(jié)合在二抗上,還可以使用鏈霉親和素標(biāo)記的酶與親和素標(biāo)記的一抗結(jié)合。此外ELISA的結(jié)果檢測(cè)還包括放射性檢測(cè)、熒光檢測(cè)、化學(xué)發(fā)光或顯色法檢測(cè)等。

4. 交叉反應(yīng)

如果抗體間發(fā)生沖突或交叉反應(yīng)就會(huì)影響整個(gè)實(shí)驗(yàn)的特異性。其中抗體來源所帶來的兼容性就是交叉反應(yīng)的一個(gè)因素。盡管現(xiàn)在購買源自動(dòng)物的抗體越來越容易,我們?nèi)杂斜匾_認(rèn)一下是否會(huì)產(chǎn)生交叉反應(yīng)的問題。在用雙抗夾心法進(jìn)行ELISA檢測(cè)時(shí),檢測(cè)用的二抗必須特異性針對(duì)檢測(cè)一抗,而不能與捕獲抗體起反應(yīng)。如果檢測(cè)用二抗與捕獲抗體結(jié)合,實(shí)驗(yàn)特異性就會(huì)大打折扣。通常我們選用源自不同宿主的捕獲抗體和檢測(cè)一抗,來避免上述問題。與此同時(shí),了解試劑盒中提供的buffer也是有必要的(例如washing bufferblocking buffer),以免這些buffer含有可能影響抗原抗體相互作用的組分,使檢測(cè)結(jié)果收到影響。

小鼠淋巴細(xì)胞趨化因子(Lptn)elisa試劑盒代測(cè)其他優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品:

RY-(elisa)-02342大鼠堿性成纖維生長因子(bFGF)ELISA試劑盒Rat basic fibroblast growth factor,bFGF ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T
RY-(elisa)-02343大鼠B細(xì)胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)ELISA試劑盒Rat B-cell leukemia/lymphoma 2,Bcl-2 ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T
RY-(elisa)-02344大鼠Bcl-2相關(guān)X蛋白(BAX)ELISA試劑盒Rat Bcl-2 associated X protein,Bax ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
RY-(elisa)-02345大鼠β細(xì)胞素(BTC)ELISA試劑盒 Rat beta cellulin,BTC ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T
RY-(elisa)-02346大鼠β內(nèi)啡肽受體(β-EPR)ELISA試劑盒Rat Beta-Endorphin receptor,β-EPR ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
RY-(elisa)-02347大鼠β內(nèi)啡肽(β-EP)ELISA試劑盒Rat Beta-Endorphin,β-EP ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
RY-(elisa)-02348大鼠β羥丁酸(βOHB)ELISA試劑盒Rat Beta-HydroRYbutyric Acid,β-OHB ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T
RY-(elisa)-02349大鼠β位淀粉樣前體蛋白裂解酶2(BACE2)ELISA試劑盒Rat beta-site APP-cleaving enzyme 2,BACE2 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
RY-(elisa)-02350大鼠BH3結(jié)構(gòu)域凋亡誘導(dǎo)蛋白(Bid)ELISA試劑盒Rat BH3 interacting domain death agonist,Bid ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
RY-(elisa)-02351大鼠大內(nèi)皮素(Big ET)ELISA試劑盒Rat Big Endothelin,Big ET ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

小鼠淋巴細(xì)胞趨化因子(Lptn)elisa試劑盒代測(cè)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)技術(shù),現(xiàn)國內(nèi)眾多科研單位與我司合作,我們列舉部分國內(nèi)科研單位:清華大學(xué)、江蘇人民醫(yī)院、廣州醫(yī)科大學(xué)、中山大學(xué)附屬第三醫(yī)院、中國醫(yī)科大學(xué)、蘭州大學(xué)、江蘇省南通市腫瘤醫(yī)院腫瘤研究所、成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院、軍事醫(yī)學(xué)*、福建農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院、*疾病預(yù)防控制所、南京農(nóng)業(yè)大學(xué)、南京大學(xué)、上海大學(xué),廣東醫(yī)學(xué)院等等國內(nèi)實(shí)驗(yàn)室單位。

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