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小鼠堿性成纖維細(xì)胞生長因子4elisa試劑盒代測

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更新時(shí)間:2015-12-04 15:15:06瀏覽次數(shù):96次

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潤裕生物小鼠堿性成纖維細(xì)胞生長因子4elisa試劑盒代測ELISA試劑盒產(chǎn)品常見技術(shù)指南:

1、選擇抗體時(shí)選擇一個(gè)單抗和一個(gè)多抗進(jìn)行配對;若選擇兩個(gè)單抗,必須識別不同表位的抗體;從同一家公司選擇抗體對。

2、ELISA實(shí)驗(yàn)中為了確定好的信號和zui低背景應(yīng)將捕獲抗體(0.5-4μg/ml)和檢測抗體(0.25-2μg/ml)在預(yù)實(shí)驗(yàn)中進(jìn)行彼此相抗的滴定。同時(shí),應(yīng)包括在適當(dāng)范圍內(nèi)的標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋。按試劑說明書常規(guī)提供的范圍進(jìn)行操作。

3、標(biāo)準(zhǔn)品的配制:對于每種細(xì)胞因子應(yīng)仔細(xì)閱讀說明書,注意每批的細(xì)節(jié)。在使用細(xì)胞因子前,瞬時(shí)離心試劑瓶,盡可能多地收回其中的細(xì)胞因子。根據(jù)每批說明書中的細(xì)節(jié),將凍干的細(xì)胞因子復(fù)溶。

4、一般待測抗原標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍的可通過將標(biāo)準(zhǔn)品做82倍系列稀釋從2000pg/ml 15pg/ml。可利用標(biāo)準(zhǔn)的ELISA操作流程、放大試劑盒、第三類試劑、或改變酶底物系統(tǒng)可在一定范圍內(nèi)提高靈敏度。

5、為了優(yōu)化靈敏度,建議過夜孵育標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本。

6、若使用過氧化物酶作為顯色系統(tǒng),應(yīng)嚴(yán)禁在洗液和稀釋液中加疊氮鈉,疊氮鈉可抑制過氧化物酶的活性。

7、當(dāng)測定混合液體中的抗原時(shí),如血清,建議在標(biāo)本稀釋液中加不相干的Ig。

目前市場上,ELISA試劑盒產(chǎn)品既有國產(chǎn)也有進(jìn)口,數(shù)量繁多令人目不暇接,怎樣才能選出zui適用的產(chǎn)品呢?首先當(dāng)然得根據(jù)我們所要檢測的分子進(jìn)行檢測,除此以外也還有一些需要加以考量的因素。

1. 抗體類型

單克隆抗體和多克隆抗體都能夠用于ELISA,實(shí)際上有時(shí)候二者結(jié)合效果更好。例如,對于雙抗夾心法而言,用多抗進(jìn)行捕獲而單抗進(jìn)行檢測有時(shí)更有幫助。多抗能夠確保捕獲所有抗原,隨后單抗再特異性檢測擁有特定抗原表位的抗原。

雙抗夾心法ELISA中捕獲抗體與檢測抗體(不論多抗還是單抗)的配對很有講究。我們不希望捕獲抗體與檢測抗體競爭抗原上的同一位點(diǎn),為此我們就需要確保捕獲抗體和檢測抗體所識別的抗原表位不存在重疊。如果捕獲抗體和檢測抗體之間發(fā)生了沖突,就會(huì)對實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生較大影響。要避免這一問題,我們可以選擇購買“matched pair"的捕獲/檢測抗體對,這些打包在一起的抗體是商家經(jīng)過驗(yàn)證才*的好組合。

2. 實(shí)驗(yàn)類型

ELISA試劑盒有多種類型,不過它們都有一個(gè)共同特點(diǎn),就是進(jìn)行抗原捕獲。一般捕獲形式包括將抗原吸附到微孔板或者用微孔板上的抗體進(jìn)行捕獲。In-cell ELISA和酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)ELISPOT是兩種特殊的類型,In-cell ELISA需要將微孔板中培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行固定和通透化,然后再用抗體原位檢測。ELISPOT有點(diǎn)像蛋白印跡Western blot,先在帶膜的微孔板中培養(yǎng)細(xì)胞,然后在膜上檢測細(xì)胞分泌的抗原形成斑點(diǎn)。此外,還需要根據(jù)自身需要選擇96孔板或是384孔板進(jìn)行ELISA實(shí)驗(yàn)。

通常人們使用雙抗夾心法進(jìn)行ELISA實(shí)驗(yàn),雙抗夾心法中抗原被夾在捕獲抗體和檢測抗體之間,這種方法既靈敏又有效,受到了許多研究者的青睞。不過有時(shí)候雙抗夾心法并不是通用的選擇,例如有時(shí)候抗原特別小讓兩個(gè)大抗體難以附著,又或者抗體只有一個(gè)抗體結(jié)合位點(diǎn)。在上述情況下,競爭性ELISA就更為適用,這種方法是采用帶標(biāo)記的純化抗原與樣本中無標(biāo)記的抗原進(jìn)行競爭,以結(jié)合捕獲抗體。

3. 檢測方式

如今檢測ELISA有許多途徑,我們可以根據(jù)自己的偏好進(jìn)行選擇。一般ELISA檢測的是酶促反應(yīng)的可溶性產(chǎn)物,抗體上結(jié)合有相應(yīng)的酶(例如通常使用的辣根過氧化物酶HRP),而反應(yīng)體系中添加有相應(yīng)的底物(如3,3-二氨基聯(lián)苯胺DAB)。這種酶促反應(yīng)生成具有特征性的顏色,可以通過分光光度計(jì)進(jìn)行檢測,堿性磷酸酶AP也是一種常用酶。酶可以結(jié)合在一抗上,也可以結(jié)合在二抗上,還可以使用鏈霉親和素標(biāo)記的酶與親和素標(biāo)記的一抗結(jié)合。此外ELISA的結(jié)果檢測還包括放射性檢測、熒光檢測、化學(xué)發(fā)光或顯色法檢測等。

4. 交叉反應(yīng)

如果抗體間發(fā)生沖突或交叉反應(yīng)就會(huì)影響整個(gè)實(shí)驗(yàn)的特異性。其中抗體來源所帶來的兼容性就是交叉反應(yīng)的一個(gè)因素。盡管現(xiàn)在購買源自動(dòng)物的抗體越來越容易,我們?nèi)杂斜匾_認(rèn)一下是否會(huì)產(chǎn)生交叉反應(yīng)的問題。在用雙抗夾心法進(jìn)行ELISA檢測時(shí),檢測用的二抗必須特異性針對檢測一抗,而不能與捕獲抗體起反應(yīng)。如果檢測用二抗與捕獲抗體結(jié)合,實(shí)驗(yàn)特異性就會(huì)大打折扣。通常我們選用源自不同宿主的捕獲抗體和檢測一抗,來避免上述問題。與此同時(shí),了解試劑盒中提供的buffer也是有必要的(例如washing bufferblocking buffer),以免這些buffer含有可能影響抗原抗體相互作用的組分,使檢測結(jié)果收到影響。

其他優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品:

RY-(elisa)-01493小鼠生長激素釋放多肽(GHRP)ELISA試劑盒Mouse Growth Hormone Releasing Peptide,GHRP ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
RY-(elisa)-01494小鼠生長激素釋放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)ELISA試劑盒 Mouse growth hormone releasing peptide-Ghrelin,GHRP-Ghrelin ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T
RY-(elisa)-01495小鼠結(jié)合珠蛋白/觸珠蛋白(Hpt/HP)ELISA試劑盒Mouse Haptoglobin,Hpt/HP ELISA KIT規(guī)格:96T/48T
RY-(elisa)-01496小鼠熱休克因子1(HSF1)ELISA試劑盒Mouse Heat Shock Factor 1,HSF1 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
RY-(elisa)-01497小鼠熱休克蛋白40(Hsp-40)ELISA試劑盒Mouse Heat Shock Protein 40,Hsp-40 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
RY-(elisa)-01498小鼠熱休克蛋白60(Hsp-60)ELISA試劑盒Mouse heat shock protein 60,hSP-60 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
RY-(elisa)-01499小鼠熱休克蛋白70(HSP-70)ELISA試劑盒Mouse Heat Shock Protein 70,Hsp-70 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
RY-(elisa)-01500小鼠熱休克蛋白90(HSP-90)ELISA試劑盒Mouse Heat Shock Protein 90,Hsp-90 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
RY-(elisa)-01501小鼠熱休克蛋白糖蛋白96(HSP gp96)ELISA試劑盒Mouse Heat Shock Protein glycoprotein 96,HSP gp96 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T
RY-(elisa)-01502小鼠幽門螺旋菌IgG(Hp-IgG)ELISA試劑盒 Mouse Helicobacter pylori IgG,Hp-IgG ELISA Kit規(guī)格:96T/48T

ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)技術(shù),現(xiàn)國內(nèi)眾多科研單位與我司合作,我們列舉部分國內(nèi)科研單位:清華大學(xué)、江蘇人民醫(yī)院、廣州醫(yī)科大學(xué)、中山大學(xué)附屬第三醫(yī)院、中國醫(yī)科大學(xué)、蘭州大學(xué)、江蘇省南通市腫瘤醫(yī)院腫瘤研究所、成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院、軍事醫(yī)學(xué)*、福建農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護(hù)學(xué)院、*疾病預(yù)防控制所、南京農(nóng)業(yè)大學(xué)、南京大學(xué)、上海大學(xué),廣東醫(yī)學(xué)院等等國內(nèi)實(shí)驗(yàn)室單位。

小鼠糖原磷酸化酶同工酶II(GP-II)elisa試劑盒代測

小鼠糖原磷酸化酶同工酶II(GP-II)elisa試劑盒代測等ELIS

小鼠糖原磷酸化酶同工酶BBelisa試劑盒代測

小鼠糖原磷酸化酶同工酶BBelisa試劑盒代測等ELISA試劑盒(酶聯(lián)

小鼠糖原磷酸化酶同工酶BB(GP-BB)elisa試劑盒代測

小鼠糖原磷酸化酶同工酶BB(GP-BB)elisa試劑盒代測等ELIS

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