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北京綠源伯德生物科技有限公司

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技術文章

細胞活性測試盒

閱讀:828發(fā)布時間:2016-11-19

產品說明

該勻相檢測法只需工作試劑至細胞培養(yǎng)液中,培養(yǎng)后即可測定熒光強度(激發(fā)波長= 530 - 570 nm,發(fā)射波長= 590 - 620 nm)。CellQuanti-BlueTM試劑,與其它基于刃天青的檢測法(如Alamar Blue試劑)相同,采用的是氧化還原顯色劑刃天青,刃天青本身并沒有熒光性,但一旦被具有代謝活性的細胞還原,則會轉化生成一種強熒光產物(試鹵靈)。活細胞很容易還原這種無毒試劑,從而使熒光強度升高,因此可用熒光分光光度計或熒光分析儀方便地檢測。非活性細胞沒有代謝能力,因此不能還原該顯色劑。所以檢測中觀察到的熒光強度能夠準確檢測活性細胞的數(shù)量。 

 

本公司生產的CellQuanti-BlueTM試劑經優(yōu)化處理,提高了敏感性、可重復性、穩(wěn)定性。這種基于細胞的勻相檢測法可在多孔板中完成。該試劑與所有培養(yǎng)基以及所有液體處理系統(tǒng)都兼容,可在96孔板和384孔板中進行高通量篩選。適用范圍包括細胞增殖、細胞毒性和細胞凋亡。

 

產品特點

安全:非放射性檢測(參見3H-胸腺嘧啶核苷摻入法檢測)。   

敏感且準確可準確定量低至100個細胞

采用96孔板和384孔板進行高通量檢測,每天可同時處理成千上萬的樣品

勻相且簡單:只需加入一種試劑的“混合-培養(yǎng)-測量”型檢測法。無需沖洗或試劑移取步驟。

高通量:在96孔板和384孔板中觀察到的Z系數(shù)通常為0.6-0.9。采用高通量篩選液體處理系統(tǒng)該檢測自動化。  

 

適用范圍

細胞增殖: 細胞因子、生長因子和營養(yǎng)成分對活體細胞的影響。

細胞毒性和細胞凋亡: 評價有毒化合物、抗癌抗體、 毒素和環(huán)境污染物等。 

藥物鑒定: 高通量篩選抗癌藥物。

 

試劑盒規(guī)格

目錄 #

試劑

CQBL-05K

5,000

50 mL

CQBL-10K

10,000

100 mL

CQBL-HTS

>50,000

自定義

 

對照試劑Cat # CTTX-050):50 mg皂素(需單獨訂購)。

 

儲存條件CellQuanti-BlueTM 試劑對光敏感,應在4°C下保存于試劑盒提供的棕色瓶內。對照試劑在-20°C下保存。保質期12個月。

 

預防措施:本產品僅供研究用。使用過程中應嚴格遵循實驗安全措施。

 

檢測步驟

CellQuanti-BlueTM檢測是基于具有代謝活性的細胞能將非熒光試劑轉化成熒光產物的原理。對大多數(shù)細胞而言,完成這種還原反應需要1至5小時。然后用熒光分析儀定量測定產物的熒光強度。雖然培養(yǎng)基大多含有酚紅,但酚紅并不會干擾檢測結果。技術要點中的所有數(shù)據都是在含有酚紅的培養(yǎng)基中測得的。

 

 

試劑制備:

注:使用前先將試劑放置至室溫。

 

 

96孔板測定步驟: 

1. 在黑色96孔組織培養(yǎng)板中培養(yǎng)細胞(80 mL)。典型的培養(yǎng)基含DMEM、10%胎牛血清和抗生素(*/*、*等)、氨基酸和其它營養(yǎng)物。不論是粘附細胞還是懸浮細胞,都可進行檢測。每孔的細胞數(shù)量可從100至80,000個之間不等。盡管本方案中使用80 mL,但培養(yǎng)體積可從50至150mL之間不等。除待測樣品外,還應設定對照孔,對照孔的培養(yǎng)基應不含細胞或細胞已經有毒試劑(如0.1%皂素)處理過。

 

2. 加入待測化合物和對照品,培養(yǎng)細胞至所需的時間(通常一整夜)。建議一式兩份或一式三份進行檢測??蓪⒋郎y化合物和對照品20 mL加入到磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)或培養(yǎng)基中。用5 mLPBS(0.1%皂素)溶液方便地配制對照試劑。

 

3. CellQuanti-BlueTM 試劑放置至室溫。向每孔中加入10 mL該試劑(每100 mL 細胞培養(yǎng)液)??筛鶕毎囵B(yǎng)液的體積調整所加試劑的體積。輕敲孔板使細胞與試劑混合,在37°C下培養(yǎng)1至5小時。

 

4. 用熒光分析儀測量每孔的熒光強度。如果采用的是Molecular Devices LJL分析儀,則應使用若丹明濾光鏡(530nm激發(fā)濾片、590nm發(fā)射濾片和570nm分色鏡)。

 

384孔板測定步驟:

1. 在黑色384孔組織培養(yǎng)板中培養(yǎng)細胞(40 mL)。每孔的細胞數(shù)量可從100至20,000之間不等。盡管本方案中使用40 mL,但培養(yǎng)體積可從25至60mL之間不等。除待測樣品外,還應設定對照孔,對照孔中的培養(yǎng)基應不含細胞或細胞已經有毒試劑(如0.1%皂素)處理過。

 

2. 加入待測化合物和對照品,培養(yǎng)細胞至所需的時間。建議一式兩份或一式三份進行檢測。建議將10 mL體積的待測化合物加入到PBS溶液或培養(yǎng)基中。

 

3. CellQuanti-BlueTM 試劑放置至室溫。向每孔中加入5mL該試劑(每50 mL細胞培養(yǎng)液)。輕敲孔板使細胞與試劑混合,在37°C下培養(yǎng)1至5小時。

 

  • 4. 用熒光分析儀測量每孔的熒光強度。如果采用的是Molecular Devices LJL分析儀,則應使用若丹明濾光鏡(530nm激發(fā)濾片、590nm發(fā)射濾片和570nm分色鏡)。

 

總則

 

培養(yǎng)時間:培養(yǎng)時間取決于細胞系。部分細胞系的代謝活性很強,因此其所需的培養(yǎng)時間比代謝活性稍弱的細胞系更短。可通過多次讀數(shù)輕松確定培養(yǎng)時間,如加入CellQuanti-BlueTM 試劑后每30分鐘讀取一次。一般來講,培養(yǎng)1至5小時就已足夠。當細胞數(shù)量很大時,培養(yǎng)時間過長(如 >18小時)可能導致非線性熒光響應。

 

細胞數(shù)量:一般來講,優(yōu)化后的 CellQuanti-BlueTM 試劑會隨著培養(yǎng)細胞數(shù)量的增加表現(xiàn)出大范圍的線性熒光響應。建議測定信噪比zui高的各孔的細胞數(shù)量。細胞數(shù)量可根據細胞連續(xù)稀釋而輕松確定。

 

對照品:盡管不是必需程序,但可以設定陽性對照品,即有細胞毒性或可促進細胞增殖。皂素是一種有細胞毒性的試劑,可從本公司購買(參見技術要點圖2)。每次檢測都應使用空白對照品,即不含細胞或所含細胞已經0.1%皂素處理過的培養(yǎng)基。根據空白對照品可以確定背景熒光,數(shù)據分析時應扣除背景熒光。 

 


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