ELISA試劑盒操作較冗繁,在操作中應(yīng)留心以下5個(gè)方面。
1. 跟著病況的開(kāi)展或由其他要素影響，某些抗體在機(jī)體內(nèi)的含量發(fā)作大幅動(dòng)搖，因此有必要對(duì)標(biāo)本進(jìn)行預(yù)處理。直接法測(cè)定中，標(biāo)本恰當(dāng)稀釋還可下降非特異性反應(yīng)。
2. 洗刷是操作進(jìn)程中抉擇試驗(yàn)成敗的一個(gè)關(guān)鍵進(jìn)程。目的是除去未聯(lián)絡(luò)的免疫反應(yīng)物，中止抗原抗體反應(yīng)，除去標(biāo)本中與反應(yīng)無(wú)關(guān)的成分、游離的酶標(biāo)物以及反應(yīng)進(jìn)程中吸附于固相載體上的非特異性物質(zhì)?？捎孟窗鍣C(jī)洗板或手工洗板，前者洗刷質(zhì)量較好，各反應(yīng)孔洗刷效果均一，批內(nèi)、批間差異小，手工洗板應(yīng)留心操控各孔洗刷效果，差異不宜太大。
3. 準(zhǔn)確判定效果須運(yùn)用ELISA試劑盒測(cè)讀儀，比色法判讀可選擇單波長(zhǎng)或雙波長(zhǎng)，根據(jù)反應(yīng)液顏色的不一樣選用不一樣波長(zhǎng)的濾光片，以空白孔校零測(cè)定反應(yīng)孔的吸光度值。酶標(biāo)儀具有出色的重復(fù)性。
4. ELISA試劑盒加樣一般運(yùn)用加液器，在ELISA試劑盒中一般有4次加樣：加標(biāo)本、加酶聯(lián)絡(luò)物、加底物和加中止液。加標(biāo)本時(shí)有必要每份標(biāo)本運(yùn)用一支移液器吸嘴，避免穿插污染。加酶聯(lián)絡(luò)物、底物和中止液時(shí)則不需更換吸嘴。
5. 在成批手工查看中，還應(yīng)留心操作時(shí)差的影響。加樣及混勻時(shí)間的差異，使抗原抗體反應(yīng)和酶促反應(yīng)時(shí)間不一致，對(duì)競(jìng)爭(zhēng)法及定量查看影響很大，不留心可能會(huì)致使過(guò)錯(cuò)效果或定量禁絕。
ELISA試劑盒測(cè)定進(jìn)程：固相包被→加待測(cè)樣品→溫育→洗刷+加酶標(biāo)物→溫育→洗刷→加底物→溫育一加中止液→比色→判定效果。
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