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技術(shù)文章

ELISA試劑盒試驗(yàn)重復(fù)性差的原因剖析

閱讀：393發(fā)布時(shí)間：2017-10-12

1、ELISA試劑盒樣品數(shù)量不一，加樣時(shí)間長(zhǎng)短不一
解決方法： 重復(fù)某一樣品時(shí)，加樣時(shí)間盡可能與*次接近
2、ELISA試劑盒樣品加入后未混勻
解決方法： 加樣后在混勻器上充分混勻
3、酶標(biāo)儀濾光片不對(duì)或輸入波長(zhǎng)不對(duì)
解決方法：TMB顯色用450/630波長(zhǎng)
4、酶標(biāo)儀測(cè)定重復(fù)性差
解決方法：校對(duì)酶標(biāo)儀
5、洗滌不正確
解決方法：洗滌液注滿各孔但不要溢出。洗板時(shí)反應(yīng)板面向下，垂直用力甩凈內(nèi)容物（可多甩幾次），在干凈、無(wú)或少塵的吸水材料上拍干。洗板機(jī)洗板時(shí)不應(yīng)有堵孔，洗滌應(yīng)充分 
6、溫育條件不一致（一次用水育，一次用恒溫箱） 
解決方法：恒溫箱溫育較水浴顯色深， OD值高出0.1-0.15,均采用恒溫箱.如用水浴水溫應(yīng)控制在37℃ 
7、不慎多加或少加酶或顯色劑 
解決方法：多加時(shí)顯色深，少加則淺，用記號(hào)筆圈上，便于分析 
8、閾值附近時(shí)陰時(shí)陽(yáng) 
解決方法：同一樣品做三個(gè)復(fù)孔，以二個(gè)（含二個(gè)以上相同結(jié)果為準(zhǔn)） 
9、ELISA試劑盒加樣量不足、保溫時(shí)間、洗滌條件一致 
盡可能使用同一移液器和裝緊吸嘴重復(fù)測(cè)定標(biāo)本。條件、人員等應(yīng)盡量與上次保持一致
 


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