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上海友騰生物科技有限公司

免疫沉淀的改進方法

時間:2014-4-18閱讀:516
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免疫沉淀是研究蛋白質常用的技術,是利用抗體特異性反應純化富集目的蛋白的一種方法??贵w與細胞裂解液或表達上清中相應的蛋白結合后,再與蛋白A/G(ProteinA/G)或二抗偶聯的agaose或Sepharose珠子孵育,通過離心得到珠子-蛋白A/G或二抗-抗體-目的蛋白復合物,沉淀經過洗滌后,重懸于電泳上樣緩沖液,煮沸5-10min,在高溫及還原劑的作用下,抗原與抗體解離,離心收集上清,上清中包括抗體、目的蛋白和少量的雜蛋白。

 

如果蛋白樣品在孵育抗體前未經珠子預處理,會導致一些非特異蛋白與ProteinA/G結合,從而干擾試驗結果。另外如果同時加入抗體和珠子,有時會出現沉淀效率不高的情況。

 

方法改進:

1、預處理:在加入抗體和珠子之前,加入20-30微升50%濃度的珠子懸浮液于蛋白裂解液中,4度搖床孵育一個小時。對于經常做IP或者CO-IP的實驗室,可以將同一種樣品*次預處理所用的珠子收集起來置于四度保存,以備下次沉淀同樣蛋白裂解液時預處理用。

2、抗體,珠子分別孵育。先將適量抗體加入蛋白裂解液中,4度搖床孵育**。然后加入適量珠子,4度搖床孵育2到3個小時。上海友騰生物傾力為客戶提供上萬種科研試劑,提供*、zui全、zui有效的科研試劑產品,質量被全國各大院校科研機構認可。
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