hbzhan內(nèi)容導讀：分光光度法是通過測定被測物質(zhì)在特定波長處或一定波長范圍內(nèi)光的吸收度，對該物質(zhì)進行定性和定量分析。常用的波長范圍為：（1）200～400nm的紫外光區(qū)（2）400～760nm的可見光區(qū),（3）2.5～25μm（按波數(shù)計為4000cm<-1>～400cm<-1>）的紅外光區(qū)。
所用儀器為
紫外分光光度計、可見光分光光度計（或比色計）、紅外分光光度計或原子吸收分光光度計。為保證測量的精密度和準確度，所有儀器應按照國家計量檢定規(guī)程或本附錄規(guī)定，定期進行校正檢定。
分光光度計是精密光學儀器，正確安裝、使用和保養(yǎng)對保持儀器良好的性能和保證測試的準確度有重要作用。
?。?）儀器工作環(huán)境的要求
分光光度計對工作環(huán)境的要求如下：
①儀器應安放在干燥的房間內(nèi)，使用溫度為5～35℃．相對濕度不超過85％。
?、趦x器應放置在堅固平穩(wěn)的工作臺上，且避免強烈的振動或持續(xù)的振動。
?、凼覂?nèi)照明不宜太強，且應避免直射日光的照射。
?、茈娚炔灰酥苯酉騼x器吹風，以防止光源燈因發(fā)光不穩(wěn)定而影響儀器的正常使用。
⑤盡量遠離高強度的磁場、電場及發(fā)生高頻波的電器設備。
?、薰┙o儀器的電源電壓為AC220V±22V，頻率為50Hz±1Hz，并必須裝有良好的接地線。推薦使用功率為1000w以上的電子交流穩(wěn)壓器或交流恒壓穩(wěn)壓器，以加強儀器的抗干擾性能。
?、弑苊庠谟辛蚧瘹涞雀g性氣體的場所使用。
（2）儀器的日常維護和保養(yǎng)
?、俟庠?。光源的壽命有限，為了延長光源使用壽命，在不使用儀器時不要開光源燈，應盡量減少開關次數(shù)。在短時問的工作間隔內(nèi)可以不關燈。剛關閉的光源燈不能立即重新開啟。
儀器連續(xù)使用時間不應超過3h。若需長時間使用，間歇30min。
如果光源燈亮度明顯減弱或不穩(wěn)定，應及時更換新燈。更換后要調(diào)節(jié)好燈絲位置，不要用手直接接觸窗口或燈泡，避免油污沾附。若不小心接觸過，要用無水乙醇擦拭。
?、趩紊?。單色器是儀器的核心部分，裝在密封盒內(nèi)，不能拆開。選擇波長應平衡地轉(zhuǎn)動，不可用力過猛。為防止色散元件受潮生霉，必須定期更換單色器盒干燥劑（硅膠）。若發(fā)現(xiàn)干燥劑變色，應立即更換。
③吸收池。必須正確使用吸收池，應特別注意保護吸收池的兩個光學面。
?、軝z測器。光電轉(zhuǎn)換元件不能長時間曝光，且應避免強光照射或受潮積塵。
?、莓攦x器停止工作時，必須切斷電源。
?、逓榱吮苊鈨x器積灰和沾污，在停止工作時，應蓋上防塵罩。
?、邇x器若暫時不用要定期通電，每次不少于20～30min，以保持整機呈干燥狀態(tài)，并且維持電子元器件的性能。
紫外—可見分光光度計類型
紫外一可見分光光度計按使用波長范圍可分為：可見分光光度計和紫外一可見分光光度汁兩類。前者使用的波長范圍為400～780nm；后者使用的波長范圍為200～1000nm。
按光路紫外一可見分光光度計可分為單光束式及雙光束式兩類；按測量時提供的波長數(shù)又可分為單波長分光光度計和雙波長分光光度計兩類。
所謂單光束是指從光源中發(fā)出的光，經(jīng)過單色器等一系列光學元件及吸收池后，zui后照在檢測器上時始終為一束光。常用的單光束紫外一可見分光光度計有751G型、752型、754
型、756MC型等。常用的單光束可見分光光度計有721型、722型、723型、724型等。
單光束分光光度計的特點是結構簡單、價格低，主要適于作定量分析。其不足之處是測定結果受光源強度波動的影響較大，因而給定量分析結果帶來較大誤差。
雙光束分光光度計是指從光源中發(fā)出的光經(jīng)過單色器后被一個旋轉(zhuǎn)的扇形反射鏡（即切光器）分為強度相等的兩束光，分別通過參比溶液和樣品溶液。利用另一個與前一個切光器同步的切光器，使兩束光在不同時間交替地照在同一個檢測器上，通過一個同步信號發(fā)生器對來自兩個光束的信號加以比較，并將兩信號的比值經(jīng)對數(shù)變換后轉(zhuǎn)換為相應的吸光度值。
常用的雙光束紫外一可見分光光度計有710型、730型、760MC型、760CRT型、日本島津UV一210型等。這類儀器的特點是：能連續(xù)改變波長，自動地比較樣品及參比溶液的透光強度，自動消除光源強度變化所引起的誤差。對于必須在較寬的波長范圍內(nèi)獲得復雜的吸收光譜曲線的分析，此類儀器極為合適。
雙波長分光光度計與單波長分光光度計的主要區(qū)別在于采用雙單色器，以同時得到兩束波長不同的單色光。光源發(fā)出的光分成兩束，分別經(jīng)兩個可以自由轉(zhuǎn)動的光柵單色器，得到兩束具有不同波長A1和A2的單色光。借切光器，使兩束光以一定的時間問隔交替照射到裝有試液的吸收池上，由檢測器顯示出試液在波長λ1和λ2的透射比差值△r或吸光度差值△A，則
△A＝Aλ1－Aλ2＝﹙Eλ1－Eλ2）bc
由式可知，△A與吸光物質(zhì)c成正比。這就是雙波長分光光度進行定量分析的理論根據(jù)。
常用的雙光束分光光度計有國產(chǎn)wFZ800S、日本島津UV一300、UV一365等。
這類儀器的特點是：不用參比溶液，只用一個待測溶液，因此可以消除背景吸收干擾，包括待測溶液與參比溶液組成的不同及吸收液厚度的差異的影響，提高了測量的準確度。它特別適合混合物和渾濁樣品的定量分析，可進行導數(shù)光譜分析等。其不足之處是價格昂貴。
