人17羥皮質(zhì)類(lèi)固醇（17-OHCS）ELISA試劑盒

實(shí)驗(yàn)原理

用純化的抗體包被微孔板，制成固相載體，往包被抗該指標(biāo)抗體的微孔中依次加入標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品、*化的抗該指標(biāo)抗體、HRP標(biāo)記的親和素，經(jīng)過(guò)*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的該指標(biāo)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值），計(jì)算樣品濃度。

試劑盒組成及試劑配制

1.         酶聯(lián)板（Assay plate ）：一塊（96孔）。

2.         標(biāo)準(zhǔn)品（Standard）：2瓶（凍干品）。

3.         樣品稀釋液（Sample Diluent）：1×20ml/瓶。

4.         *標(biāo)記抗體稀釋液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。

5.         辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。

6.         *標(biāo)記抗體（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）

7.         辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）

8.         底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。

9.         濃洗滌液（Wash Buffer）：1×20ml/瓶，使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25倍。

10.     終止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。

需要而未提供的試劑和器材

1.         標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀

2.         高速離心機(jī)

3.         電熱恒溫培養(yǎng)箱

4.         干凈的試管和Eppendof管

5.         系列可調(diào)節(jié)移液器及吸頭，一次檢測(cè)樣品較多時(shí)，用多通道移液器

6.    蒸餾水，容量瓶等

標(biāo)本的采集及保存

1.         血清：全血標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜后于1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

2.         血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

3.         細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本：1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

注：標(biāo)本溶血會(huì)影響zui后檢測(cè)結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)。

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