安底斯馬鈴薯潛在病毒（APLV）ELISA試劑盒

操作基本步驟：

1、 試劑準(zhǔn)備：所有試劑在使用前應(yīng)平衡至室溫，使用后請(qǐng)立即按照說明書要求保存試劑。實(shí)驗(yàn)操作中請(qǐng)使用一次性的吸頭，避免交叉污染。

2、 加樣：加樣或加試劑時(shí)，*個(gè)孔與zui后一個(gè)孔加樣之間的時(shí)間間隔如果太大，將會(huì)導(dǎo)致不同的 “預(yù)溫育”時(shí)間，從而明顯地影響到測(cè)量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。一次加樣時(shí)間（包括標(biāo)準(zhǔn)品及所有樣品）控制在10分鐘內(nèi)。*設(shè)置復(fù)孔進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

3、 溫育：為防止樣品蒸發(fā)，實(shí)驗(yàn)時(shí)將加上蓋或覆膜的酶標(biāo)板置于濕盒內(nèi)，以避免液體蒸發(fā)；洗板后應(yīng)盡快進(jìn)行下步操作，任何時(shí)侯都應(yīng)避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài)；同時(shí)應(yīng)嚴(yán)格遵守給定的溫育時(shí)間和溫度。

4、 洗滌：洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上拍干，勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水，同時(shí)要消除板底殘留的液體和手指印，避免影響zui后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。

5、 試劑配制：Detection A及Detection B在使用前請(qǐng)手甩幾下或少時(shí)離心處理，以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液A工作液、檢測(cè)溶液B工作液請(qǐng)依據(jù)所需的量配制使用，并使用相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆。請(qǐng)精確 配制標(biāo)準(zhǔn)品及工作液，盡量不要微量配制（如吸取檢測(cè)溶液A時(shí)，一次不要小于10 ），以避免由于不準(zhǔn)確稀 釋而造成濃度誤差；請(qǐng)勿重復(fù)使用已稀釋過的標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液A工作液、檢測(cè)溶液B工作液。

6、 反應(yīng)時(shí)間的控制：加入底物后請(qǐng)定時(shí)觀察反應(yīng)孔的顏色變化（比如，每隔10分鐘），如顏色較深，請(qǐng)?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng)，避免反應(yīng)過強(qiáng)從而影響酶標(biāo)儀光密度讀數(shù)。

7、 底物：底物請(qǐng)避光保存，在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。

抗原檢測(cè)的意義可做為抗原進(jìn)行檢測(cè)的物質(zhì)可分為以下四類：

 （ 1）各種微生物及其大分子產(chǎn)物：用于傳染病診斷、微生物的分類及鑒定以及對(duì)菌苗、疫苗的研究。

 （2）生物體內(nèi)各種大分子物質(zhì)：包括各種血清蛋白（如各類免疫球蛋白、補(bǔ)體的各種成分）、可溶性血型物質(zhì)、多肽類激素、細(xì)胞因子及癌胚抗原等均可做為抗原進(jìn)行檢測(cè)。在對(duì)這些成分的生物學(xué)作用的研究以及各種疾病的診斷有重要意義。

 （3）人和動(dòng)物細(xì)胞的表面分子：包括細(xì)胞表面各種分化抗原（如CD抗原）、同種異型抗原（血型抗原或MHC抗原）、病毒相關(guān)抗原和腫瘤相關(guān)性情抗原等。檢測(cè)這些抗原對(duì)各種細(xì)胞的分類、分化過程及功能研究、對(duì)各種與免疫有關(guān)的疾病的診斷及發(fā)病機(jī)制的研究，均有重要意義。

 （4）各種半抗原物質(zhì)：某些藥物、激素和炎癥介質(zhì)等屬于小分子的半抗原，可以分別將它們偶聯(lián)到大分子的載體上，組成人工結(jié)合的*抗原。用其免疫動(dòng)物，制備出各種半抗原的抗體，應(yīng)用于各種半抗原物質(zhì)的檢測(cè)，例如對(duì)某些病人在服用藥物后進(jìn)行血中藥物濃度的監(jiān)測(cè)。對(duì)運(yùn)動(dòng)員進(jìn)行服用違禁藥品的檢測(cè)，都是應(yīng)用半抗原檢測(cè)的方法。

三、抗原或抗體檢測(cè)的方法

 由于各種檢測(cè)方法中所用的抗原性狀不同，出現(xiàn)結(jié)果的現(xiàn)象也不同。zui廣泛應(yīng)用方法有下述幾種：

 （一）沉淀反應(yīng)

 可溶性抗原與抗體結(jié)合，在兩者比例合適時(shí)，可形成較大的不溶性免疫復(fù)合物。在反應(yīng)體系中出現(xiàn)不透明的沉淀物，這種抗原抗體反應(yīng)稱為沉淀反應(yīng)（precipitation neaction）。

 1．環(huán)狀沉淀試驗(yàn)　　先將含抗體的未稀釋的免疫血清加到直徑小于 0.5cm的小試管底部。將稀釋的含有可溶性抗原的材料重疊于上，讓抗原與抗體在兩液體的界面相遇，形成白色免疫復(fù)合物沉淀環(huán)，故名為環(huán)狀沉淀試驗(yàn)（ring precipitationtest）,此法簡(jiǎn)便易行，需用材料較多是其缺點(diǎn)。

 2．單向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)　　單向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)（singleimmunodiffusion）是在凝膠中進(jìn)行的沉淀反應(yīng)。將抗體混入加熱溶解的瓊脂中，傾注于玻片上，制成含有抗體的瓊脂板，在適當(dāng)位置打孔，將抗原材料加入瓊脂板的小孔內(nèi)，讓抗原從小孔向四周的瓊脂中擴(kuò)散，與瓊脂中的抗體相遇形成免疫復(fù)合物。當(dāng)復(fù)合物體積增加到一定程度時(shí)停止擴(kuò)散，出現(xiàn)以小孔為中心的圓形沉淀圈，沉淀圈的直徑與加入的抗原濃度成正相關(guān)。本方法簡(jiǎn)便，易于觀察結(jié)果，可測(cè)定抗原的靈敏度（zui低濃度）約為10～20μg/ml，常用于定量測(cè)定人或動(dòng)物血清IgG、IgM、IgA和C3等，其缺點(diǎn)是需1～2天才能看結(jié)果